诺如病毒实验室检测方法

为避免实验室污染，食品、水、环境样品与病人标本不能在同一实验室检测，必须分别在独立的空间进行样品处理和检验。

⑴ Real‐time RT‐PCR

ORF1/ORF2 区是诺如病毒基因组中最保守的区域，在同一基因型不同毒株间有相同的保守序列， 根据这段保守区域可用于设计 TaqMan 为基础的 Real‐time RT‐PCR 的引物和探针。除可检测病例临床 标本中的诺如病毒 RNA 外，引物和探针经优化提高灵敏度后，还可用于环境样本（如食物和水）的 检测。Real‐time RT‐PCR 的敏感性高于传统 RT‐PCR，可检测诺如病毒 G I 群和 G II 群。

⑵ 传统 RT‐PCR

采用传统 RT‐PCR 对 Real‐time RT‐PCR 阳性标本的 PCR 产物进行测序，通过序列分析确定诺如病 毒的基因型。测定 ORF2 完整衣壳蛋白基因序列，是诺如病毒基因分型的金标准。基因组中四种不 同的区域（Region A‐D）均可用于诺如病毒基因分型，基于衣壳蛋白区 Region C 和 D 两区域分型效 果更好。但对于 GII.4 变异株的进一步分型，仅根据 Region C 序列不足以区别，需进一步扩增 Region D。

抗原检测

由于诺如病毒抗原高度变异（基因型超过 29 个）且某些基因型存在抗原漂移（如 GII.4 型）， 开发广泛反应的 ELISA 方法存在较大挑战。虽然目前已有商品化的试剂盒如 IDEIA（Oxiod,英国）、 SRSV(Ⅱ)‐AD（Denka Seiken,日本）以及 RIDASCREEN（r‐Biopharm AG，德国），但其敏感性（36%‐80%） 和特异性（47%‐100%）均不太理想。即使已通过美国 FDA 认证的 RIDASCREEN 诺如病毒第三代 ELISA 试剂盒，也没有在美国广泛应用。ELISA 可适用于暴发疫情中大量样本的筛查，但不适合散发病例的 检测。ELISA 检测结果阴性的样本还需要通过 Real‐time RT‐PCR 进行第二次检验确认。鉴于 ELISA 试 剂盒成本高、敏感性低，ELISA 方法仅可作为辅助检测手段。