冷凝集是指在体外、低温（通常＜30℃）条件下红细胞发生可逆性凝集的现象，当温度上升至37℃时凝集现象消失。
血液标本出现冷凝集会干扰血常规检测，影响检测结果，尤其是红系相关参数的准确性。冷凝集影响血液分析仪检测的表现为：红细胞计数（RBC）假性减低、红细胞压积（HCT）假性减低、红细胞平均体积（MCV）假性增高、红细胞平均血红蛋白含量（MCH）假性增高、红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）假性增高。
那么，在日常检验工作中我们该如何处理冷凝集标本呢？一般大家都会对冷凝集标本进行37℃孵育，对于冷凝集素效价较低的标本，孵育30分钟能得到很好的纠正效果；但对于高效价冷凝集素的标本，则需要延长孵育时间。除此之外，还有血浆置换法、预稀释法等，但都费时费力。我们期望寻找一种快速、简单、有效的方法来解决这一问题。
下面与各位同行分享一例“用网织红通道研究参数RBC-O、电阻抗通道研究参数R-MFV计算MCHC，纠正冷凝集标本血常规检测结果”的案例。
患者中年女性，慢性病程，因“左侧上颌窦肿物术后1月”入院，既往史、个人史、入院查体均无特殊。入院后送检血常规，检测结果如下图所示：
红系相关参数均被标记*，同时仪器报警“RBC Agglutination? Turbidity Interf?（红细胞凝集？浑浊干扰？）”报警强度均为300，如下图所示：
从首次检测结果很明显可以看出：RBC、HGB、HCT三者之间不成比例，MCHC远远超过380g/L。结合仪器报警信息，触犯本实验室血常规复检规则，因此，检验人员根据复检规则采取一系列处理措施：
抗凝血呈凝固状态，轻轻摇动试管，管壁出现明显的细砂状颗粒，如图所示：
查看标本性状确定为冷凝集标本后，采取孵育的方法消除干扰。按照惯例孵育30分钟后再次进行检测，结果如图所示：此次检测MCHC 375g/L，仪器依旧提示“Turbidity Interf?”，说明冷凝集未完全纠正，因此延长孵育时间至60分钟，再次进行检测，结果如图所示：第三次检测MCHC 348g/L，仪器报警消失。至此，冷凝集对血常规结果带来的干扰得到完全纠正，结果可信。RBC-O是RET通道检测的光学红细胞，代替RBC-I；R-MFV是红细胞直方图峰值对应的体积，可理解为检测中出现频率最高的红细胞体积，代替MCV。因此，RBC修正=RBC-O，MCV修正=R-MFV。HGB结果准确，不用修正。通过公式“HCT修正=RBC-O*R-MFV、MCH修正=HGB/RBC-O、MCHC修正=HGB/HCT”来计算红系各项参数，加做RET通道，结果如图所示：
RBC-O 4.66×1012/L、R-MFV 86.7fl，根据上述公式得到：RBC修正=4.66×1012/L、HCT修正=40.4%、MCV修正=86.7fl，MCH修正=27.3pg、MCHC修正=314g/L。不同方法纠正冷凝集标本血常规红系参数结果比较，如下表：两种处理方法比较，孵育法（37℃ 30分钟）对低效价的冷凝集素有较好纠正效果，对于高效价的冷凝集素需延长孵育时间，实际操作费时费力，会导致血常规TAT时间大幅延长，临床不能及时得到准确的报告；而采用RBC-O、R-MFV来计算得到红系相关参数，不仅省时省力，还能很好地消除冷凝集对血常规检测带来的影响，值得我们深入研究，推广应用。
本实验室使用的血常规检测仪器为Sysmex XN9000全自动血液分析仪，红系各参数的检测原理分别为：红细胞通过检测小孔形成脉冲，脉冲数量代表红细胞数量，脉冲高度代表单个红细胞体积。在稀释的血液中加入溶血剂将红细胞溶解，释放出HGB，HGB与溶血剂中相关成分结合形成衍生物，在555nm波长处进行比色，其吸光度值的变化与HGB的含量成正比。冷凝集标本中，红细胞凝集成团导致体积增大，当超过250fl时，红细胞不被仪器识别，使得RBC计数假性减低，HCT也随之假性减低；成团的红细胞通过检测小孔时，导致脉冲增大，使得MCV假性增高。而HGB的检测方法为比色法，不受此影响，因此由RBC、HGB、HCT计算得来的其他红系参数MCH、MCHC假性增高。该血液分析仪的RET通道采用半导体激光流式细胞术+核酸荧光染色法，且该通道配置有41℃加热设备，因此理论上可以排除冷凝集的干扰，得到相对可靠的RBC-O。MCV是所有进入检测范围（25-250fl）内的红细胞的平均体积，包括单个和聚集成团的红细胞。而R-MFV是检测中出现频率最高的红细胞体积，未纳入或只纳入一小部分聚集的红细胞，因此理论上R-MFV比MCV更可靠。在临床检验工作中，尤其是秋冬季节环境温度低时，冷凝集素效价较高的患者血液离体后发生红细胞凝集的现象较多，干扰血常规检测。通常实验室的处理方法是37℃孵育后再次检测，但此方法耗时，特别是强冷凝集的标本，有的甚至需要孵育2小时之久，不能快速出具报告，影响临床诊疗。而血浆置换、预稀释这两种方法需要进行手工操作，对操作人员有较高要求，操作不规范可能会影响检测结果的准确性。血液分析仪研究参数RBC-O、R-MFV能较好地替代RBC-I、MCV，通过计算得到较为可靠的MCH、MCHC。此法不需要手工操作，加做RET通道即可，因此本实验室特别设置一条自动复检规则（reflex）——当仪器出现“Turbidity Interf?”报警信息时，自动执行RET通道。各位同道可以参考本实验室的经验设置规则。时值秋冬季节，冷凝集标本出现的频率将越来越高，尤其是北方寒冷地区。相较于传统纠正方法，越来越多的研究参数被发现利用，或者是老参数新用法。大家可以多与厂家工程师交流，了解更多仪器性能；多查阅文献，学习同行经验，为临床提供快速、准确、可靠的检验结果。另外，本计算方法在本实验室运用时间较短，标本数量较少，也未能检测冷凝集素效价，需要继续扩大标本量，深入研究，来更深层次地验证RBC-O、R-MFV的价值。后续会继续与大家分享。吴宗勇，中国医学科学院肿瘤医院深圳医院检验科、输血科副主任，主任技师
冷凝集标本在肿瘤医院检验科还是比较常见的，它不仅受天气影响，还与某些抗肿瘤药物使用有关。笔者通过手工法和仪器法对比实验，找到省时省力且可缩短TAT的处理方法，即利用XN9000的RET通道的半导体激光流式细胞术+核酸荧光染色法，该法的研究参数RBC-O、R-MFV能较好地替代RBC-I、MCV，通过计算得到较为可靠的MCH、MCHC检测结果。因此，利用仪器法解决样本冷凝集带来的误差值得深入研究和推广。
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