比较不同的化学发光技术

归去来兮 2024-10-16 03:42 PM 251人围观技术

主流的化学发光平台

1.直接化学发光（吖啶酯或吖啶磺酰胺）

吖啶酯、吖啶磺酰胺是直接化学发光的代表，无须催化直接发光。属于闪光型。四大家中雅培用的是吖啶磺酰胺，西门子Centaur系列用的是吖啶酯。

（图片来自于网络）

2.酶促化学发光

常见的酶促发光平台有辣根过氧化酶（HRP)、碱性磷酸酶（AP），这种发光是需要酶催化底物而产生光信号，而且光信号是辉光型。AP酶代表化学发光试剂厂家：贝克曼、迈瑞等，HRP代表厂家安图。

（图片来自于网络）

3.电化学发光

常见的是以三联吡啶钌标记抗体，以三丙胺（TPA）为电子供体，在电场中发生电子转移而发光化学发光反应。代表厂商就不用多说了，四大家中有罗氏，国内的厂商中有普门、联众泰克、安赛等。

（图片来自于网络）

电化学发光高端但也想对小众，国内主流的仍然以吖啶酯（AE）和碱性磷酸酶（AP）两个发光平台为主。2019年底我们调研，AE和AP两个试剂厂家占比大概是50%：50%；到2022年底，我们再次的调研结果成了60%：40%。AE的“玩家”占了上风。现在到了2024年，AE的比例似乎更高了。

因为很多新进入发光领军的“玩家”都会选择AE平台。我们也问过一些客户他们选择AE发光平台的考量是什么，总结起来答案有两种：

1.这个工艺、方法比较简单；

2.成本比较低。

那这两种方法学的差异大吗？

下面，基于行业的一些经验，介绍吖啶酯（AE）和碱性磷酸酶（AP）两种发光的特点。

吖啶酯（AE）和碱性磷酸酶（AP）

两种发光的特点

1.吖啶酯化学发光

国内最常用的吖啶酯或吖啶磺酰胺其实只有以下两种。

发光基理也差不多，如下图：

那么，吖啶酯（吖啶磺酰胺）化学发光的特点是什么？

标记相对简单——蛋白与吖啶酯（磺酰胺）直接孵育、透析即可
无需催化剂——碱性环境的H2O2即可直接激发发光
无需增强剂——本底低，信噪比高
双底物组分——需要预激发液和激发液
闪光型——发光信号持续时间很短，对发光仪要求高

但我们从一些文献中也获取到一些信息，比如西门子早期就做了大量的研究，他们研究了很多不同结构的吖啶酯对试剂性能的影响。

Analytical Biochemistry 406 (2010) 204–213

研究表明，不同的项目或者说不同的抗体，最适合的吖啶酯（吖啶磺酰胺）的结构其实是不一样的。换句话说，要想让试剂达到最佳的性能，这个抗体连哪种结构的吖啶酯，是不是都要试一遍？据说，雅培内部也有各种各样结构的吖啶磺酰胺。所以，从这个角度来说，AE发光试剂的开发也不见得就简单。之所以觉得简单，可能我们还没有真正到人家的那个高度。

2.碱性磷酸酶化学发光

对于AP，其发光原理和吖啶酯完全不同。但不管是哪种底物，其原理可以理解为分成两步：第一步是底物A催化产生中间产物B，中间产物B分解成终产物C产生光信号。