细胞培养中碰到支原体污染怎么办？

归去来兮 2024-6-24 05:03 PM 58人围观科普

在细胞培养的过程中支原体污染是一个让人头疼的问题。它如同一个“不速之客”，悄然潜入细胞培养体系，给我们的实验带来诸多困扰。你是否有过这样的经历，培养的细胞无声无息地就被毁掉了？实验数据很难重复？

那么，当我们遭遇支原体污染时，该如何应对呢？今天，让我们一起来探讨这个困扰。

支原体是一种直径大小仅为0.1-0.3μm，无细胞壁，可轻松透过一般过滤膜混入培养系统中的最小最简单的原核生物，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状，分枝状等多种态。它不同于细菌，也不同于病毒，种类繁多，分布广泛，所以防不胜防！

先看下支原体污染的检测方法，以下是一些常用的检测技术：

1 DNA染色法：使用如Hoechst 33258或DAPI这类荧光染料对细胞核DNA进行染色，然后在荧光显微镜下观察。支原体污染的细胞通常会出现异常的核形态。

2 PCR（聚合酶链反应）：这是一种非常敏感和特异的检测方法，可以检测到非常低水平的支原体DNA。通过设计特异性的引物，PCR可以针对特定的支原体种或属进行检测。

3 细胞形态学观察：在光学显微镜下观察细胞的形态变化，细胞生长速度变慢，支原体污染的细胞可能会出现细胞连接松散、细胞形态不规则等变化。

细胞培养中如果发现支原体污染，需要采取一系列措施来处理这个问题。以下是一些常见的处理步骤：

1 隔离污染细胞：立即将受污染的细胞系与其他细胞系隔离，避免交叉污染。

2 丢弃污染细胞：如果污染程度严重，可能需要丢弃这些细胞，以防止污染扩散。

3 清洁培养设备：对细胞培养箱、移液管、培养皿等所有可能被污染的设备进行彻底清洁和消毒。

4 更换培养基：更换所有可能被污染的培养基和试剂。

5 抗生素治疗：如果决定尝试挽救细胞，可以使用针对支原体的抗生素（如普鲁卡因青霉素、四环素类抗生素等）进行治疗。治疗期间需要定期监测支原体的存在。

6 连续传代：在抗生素治疗后，连续几代细胞培养中未检测到支原体，才可认为细胞已经清除了污染。

支原体具有很强的顽固性，尽管有能够清除它的试剂，但预防支原体污染的工作依然至关重要。以下是几个主要方面：

其一，规范细胞培养技术始终是预防支原体感染的最优途径。在细胞培养工作中，要特别注意对环境污染的控制，严格规范实验操作，确保细胞培养基和器材的无菌状态，还可以在细胞培养基中适量添加抗生素等。

其二，搭配使用预防试剂也是一种有效方法。如一些商用的支原体预防试剂，是一种特异性预防支原体污染的抗生素。

其三，定期检测也不可或缺。支原体感染会导致培养细胞逐渐衰败，将定期支原体检测常规化并坚持下去，是细胞培养实验室应对支原体污染的关键举措。

希望今天的分享能让大家在面对支原体污染时不至于惊慌失措，让我们一起在科学探索的道路上不断前行，共同进步，祝小伙伴的细胞实验都顺利！

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来源: Super Lab

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