生化分析仪检测项目，为什么要按照这个顺序？

目前，实验室使用的全自动生化分析仪（Automatic biochemical analyzer，ABA）具有检验速度快、标本用量少等诸多优点，但同样存在一些缺陷，如交叉污染。交叉污染（也称携带污染）是 ABA 在样品检测过程中常见的问题，据文献报道，生化项目间试剂的携带污染率最高可达 300.0%。

污染物可以按耗材（如，样品、稀释剂、试剂、反应混合物和洗涤液）或残留部位（如，样品杯、样品探头、试剂探针和洗涤站）进行分类。研究发现，在实践中观察到以下类型的残留：1）样品探针中的样品残留；2）从稀释剂到样品杯中样品的残留；3）从一个反应混合物到另一个反应混合物的残留；4）从试剂到试剂探针的反应混合物的残留。

这些均会造成某个检测项目对随后的一个或数个项目检测的污染。另外，随着使用年限增长，仪器和零件的损耗，污染现象会加剧，样品检测的准确性和重复性也会随之降低。因此，对于全自动生化分析仪检测来说，避免交叉污染是重中之重。

01 葡萄糖和尿酸与无机磷

无机磷试剂主要是采用磷钼酸盐复合物直接分析法，反应生成的未还原磷钼酸盐复合物与样本中的磷含量成正比，而葡萄糖和尿酸检测试剂均采用磷酸盐缓冲液作为试剂缓冲液，如果先测定含有磷酸盐缓冲液的项目再测定无机磷，所测结果将偏高，且干扰程度与磷酸盐缓冲液的浓度成正比。因此测试时，需要将试剂中含有磷酸盐缓冲液的项目放在无机磷项目后面。

02 尿素与谷氨酸脱氢酶

尿素测定一般采用尿素酶-谷氨酸脱氢酶法，其检测试剂中本就含有谷氨酸脱氢酶（GLDH），如先测定尿素再测定 GLDH，可使结果偏高。

03 甘油三酯与血清镁

甘油三酯检测试剂盒中主要组成成分之一为镁（Mg²⁺），如先测定甘油三酯再测定血清镁，可使镁检测结果偏高。此外，其他许多含镁的试剂如淀粉酶、肌酸激酶、碱性磷酸酶、二氧化碳等直接污染也可以影响镁的测定。

04 总胆固醇和甘油三酯与总胆汁酸

总胆固醇和甘油三酯检测试剂都含有高浓度的胆酸盐，检测时试剂的用量通常为 300 微升左右，而测定总胆汁酸用的血清所需微量（一般 < 10 uL），如果试剂针冲洗不干净，即使有极微量残余也可以对总胆汁酸的测定造成影响。

05 腺苷脱氨酶与血钾

ADA 试剂中含有高浓度的 K⁺，如试剂针或搅拌棒未彻底清洗干净，会将 K⁺ 带到血钾测定的反应体系中影响血钾的测定结果，使测定结果偏高。此外，葡萄糖、总蛋白与酸性磷酸酶试剂中也含有较高浓度的钾离子，也干扰血钾检测。

06 肌酸激酶与血清胆固醇值

据研究报道，在肌酸激酶（CK）后测定血清胆固醇值可显著降低（≤ 100 mg/dL），这是由于 CK 试剂的一种成分干扰了胆固醇测试过程。

在胆固醇测试过程中，会产生过氧化氢（H₂O₂），这种 H₂O₂ 在 505 nm 处将 4-氨基安替比林和苯酚氧化转化为红色的醌-亚胺染料，与胆固醇浓度成正比。CK 试剂含有 N-乙酰半胱氨酸，可作为活性氧的清除剂，并使羟基自由基、超氧化物和 H₂O₂ 失活，将含有 N-乙酰半胱氨酸的 CK 试剂带入胆固醇测定中，会分解反应过程中释放的 H₂O₂，从而降低胆固醇水平。

07 甘油三酯与脂肪酶

研究发现，在部分样品中发现脂肪酶高于正常淀粉酶（> 500 IU/L）。然而，立即重新检测这些样品的脂肪酶则显示正常脂肪酶水平（< 80 IU/L）。经查发现所有测定甘油三酯（TG）的样品，立即测定脂肪酶，结果显示脂肪酶值升高（> 500 IU/L），此为试剂残留引起的脂肪酶假性升高。

甘油三酯（TG）测试过程中，在第一个反应中，TG 被脂肪酶水解成甘油和三种脂肪酸。甘油在甘油激酶催化下，产生甘油-3-磷酸。上述 TG 试剂中使用的脂肪酶，如果未从探针和比色杯中完全洗出，则会严重干扰脂肪酶分析。如果在 TG 测试后立即进行脂肪酶分析，则会发生这种干扰。且研究发现，脂肪酶值的误差频率与 TG 水平无关，在 TG 的高、低或正常水平之间，该发作的频率没有显著差异。

08 总蛋白与镁离子

总蛋白试剂不含镁，但含有较高浓度的硫酸铜成分，铜离子与二甲苯胺蓝的发生显色反应干扰镁的检测结果。由于总蛋白与镁的测定多为单试剂法，残留的总蛋白试剂可通过 R1 试剂探针的携带干扰镁离子的结果。

09 ALT 和 AST 与乳酸脱氢酶

ALT、AST 多使用 IFCC 速率法，其试剂中含有高活力 LDH 成分，有可能会对 LDH 的测定带来干扰，使结果偏高。

10 淀粉酶与 Ca²⁺

淀粉酶试剂中含有较高浓度的钙离子，会使血钙检测结果升高。

11 pH 值的干扰

大多数酶反应 pH 值在 6.0~7.5 之间，而双缩脲法测血清总蛋白，反应需在碱性条件下（pH 值在 8~9）。若因交叉污染使下一反应的 pH 值改变，将对项目产生影响。

12 其他试剂污染

Mg²⁺ 测定试剂的络合剂能与铁结合，影响铁与铁络合剂的结合；直接胆红素试剂含有 EDTA，Mg 试剂中含有 EGTA（钙离子螯合剂），均能与 Ca²⁺ 结合，从而影响 Ca²⁺ 的测定；总胆固醇试剂中含有胆固醇酯酶，可水解胆固醇酯形成游离胆固醇，而引起对游离胆固醇测定的干扰等等。

01 设置更完善的清洗程序

交叉污染确认之后，首先设置清洗程序，按照疑似交叉污染确认方法判断清洗效果。首先水清洗，无效的改为碱洗；如果碱洗无效，改为酸洗。也可根据污染物类型选择洗液，酸性洗液通常用于 Cu²⁺、Ca²⁺、Mg²⁺ 等污染；碱性洗液可针对酶类干扰。酸碱清洗均无效时，建议更换管道。

另外，还可以对单个项目设置特殊清洗程序，如 HbA1C 每日样本量 > 100 份时可执行特殊清洗，以防交叉污染。

02 调整项目测定顺序

清洗之后如果没有改善，需调整实验项目顺序，将相互干扰的项目分开的同时，考虑方法学等方面的因素，如对 pH 要求较高的酶类检测项目，调整项目顺序将反应时 pH 接近的项目放在一起，避免交叉污染及节省时间。

另外，在两者之间插入非干扰项目，或将被污染项目放至污染项目前解决，使得测定的结果与单测该项目时无显著性差异，从而解决交叉污染的问题。但在插入非干扰项目之前应先检测携带污染的持续性，从而确定应插入的非干扰项目的项目数。

03 加强仪器的维护与保养

日常工作中一定要注意加强仪器的维护及保养，使用原装的碱性清洗液，定期清洗比色杯、加样针、搅拌棒等，保持仪器的管路清洁，同时也要关注探针、搅拌棒表面的黏附材料是否脱落，是否存在不光滑、不均匀等情况；关注搅拌棒位置是否正确，有无搅拌溅出等异常情况，有无比色杯废液残留；在更换不同方法的新试剂时应进行携带污染评估，减少或避免携带污染的发生。在仪器携带污染频次增加，排查困难时，应当尽快更换探针、搅拌棒、比色杯、管道等配件。