革兰染色标准操作规程

1、目的

规范革兰染色标准操作规程。

2、原理

细菌样本先经紫色草酸盐结晶复合物染色，之后用 Lugol- PVP 媒染剂处理以促进染料与革兰阳性菌的结合。经乙醇丙酮的脱色作用，革兰阴性菌中的结晶紫会被洗脱。番红精则是作为复染剂：革兰阴性菌呈现粉红色，而革兰阳性菌呈现紫色。

3、试剂

3.1.结晶紫草酸盐溶液：结晶紫 2%、乙醇20%、草酸 0.8%。

3.2.稳定 Lugol-PVP复合物：碘 1.3%、碘化钾2%、PVP（聚乙烯咯烷酮）10%。

3.3.脱色剂：95%乙醇50%、丙酮 50%。

3.4.番红精溶液：番红精0.25%、95%乙醇 10%。

4、操作步骤

4.1.初染：第一液初染剂（结晶紫）染色 10s、水洗

4.2.媒染：第二液媒染剂（碘液）染色 10 s，水洗。

4.3.脱色：第三液脱色剂（95%乙醇）脱到无紫色脱落为止，10~20s水洗。

4.4.复染：第四液复染剂（石炭酸复红或沙黄）染色10s，水洗。自然干燥后镜检。

5、质量控制

5.1.采用大肠埃希菌 ATCC25922质控标准菌株，每周1次有室内质控记录。

5.2.采用金黄色葡萄球菌 ATCC 25923 质控标准菌株每周1次有室内质控记录。

6、结果判断

革兰阳性菌呈紫色，革兰阴性菌呈红色。

7、注意事项

7.1.染色的结果常受操作者技术影响，尤其是容易过度脱色，往往阳性染成阴性。

7.2.在同一载玻片上，需用已知金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌做阳性及阴性对照。

7.3.染色关键在于涂片和脱色,涂片不宜过厚，固定不宜过热，脱色不宜过度。

7.4.菌龄以18~24h为佳。

8、用途

8.1.鉴别细菌：可将细菌分为阳性和阴性两大类，因而可以初步识别细菌,缩小范围，有利于进一步鉴定。

8.2.选择药物：革兰阳性菌与阴性菌的细胞壁结构有很大差别，因而抗菌药物有差异。