实验中的抗体应用问题和解决方案

归去来兮 2024-3-21 05:48 PM 818人围观技术

抗体是一种由浆细胞（效应B细胞）分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质，仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中，及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原。

做流式的抗体和免疫组化的抗体是一样的吗?

不一定能通用。流式是用直接标记还是间接标记?如果是直接标记的话，那这个抗体一般不是FITC标记或者就是TRITC，PE之类的。如果恰好你的免疫组化，也是想用荧光素标记的抗体来直接标记，那就可以通用。如果你的免疫组化要用其它的标记的话，或者是间接标记的话，就有麻烦，因为荧光素的标记很可能会影响二抗和一抗的结合。

为什么我的抗体做WB非常好，而做不了IF，IHC等其他任何实验?

首先恭喜你有一个WB非常好的抗体，毕竟能获得做WB非常好的抗体也不容易。其次，你这个抗体很可能是通过人工合成多肽得到的，和上面所述，你用来做抗原的多肽恰好被包埋在蛋白质的中心，因此只能识别WB中线性的部分。

如何选择免疫组化抗体?

首先，一抗是选择单克隆抗体还是多克隆抗体，单克隆抗体特异性强，灵敏度低;多克隆抗体灵敏度高，特异性弱。根据你的实验结果，如果非特异多，那么选择单克隆抗体;如果阳性信号弱，不妨选择多克隆抗体试试。一般家兔来源的都是多克隆，小鼠来源的是单克隆。其次是要弄明白该一抗能够识别什么种属的抗原，抗体说明书上面一般注明有，比如小鼠Mus, 大鼠Rat, 人Hum。

再次比较重要的是要注意一抗的来源。比如我们在人的癌组织中做p53的免疫组化，一抗我们采用的是小鼠来源的p53抗体，那么二抗我们一定要选择抗小鼠的二抗比如(山羊抗小鼠，兔抗小鼠)，这一点非常重要。最后，一般的抗体说明书都会注明能做什么实验，如果标明了不可以做免疫组化，一定不要选择;反过来说，即使标明了可以做免疫组化，也不一定能够做，商家只会夸大其效果。

WB和IF的二抗是一样的吗?

很明显，不是!免疫荧光抗体是用于免疫荧光试验的，是用FITC或PE等标记的抗体，结果需要紫外线激发并用荧光显微镜观察WB抗体一般是HRP或碱性磷酸酶等标记的抗体，需显色底物(如OPDTMB等)直接显色(肉眼)或化学发光法显影(需特殊仪器)。

做CHIP的抗体是否可以用来做WB抗体?

不一定，一般来说做CHIP级别的抗体对抗体纯度特异性方面都要求比较高，基本上能做CHIP的抗体都可以做WB。但是如果CHIP的抗体识别的是构象表位(比如是由两个实际靠在一起但变为线性结构之后相隔很远的两端序列)，而不是线性表位，这种CHIP抗体做不了WB。

抗体说明书上面没有写该抗体能够用于某项实验怎么办?

一般而言，抗体研发出来之后都要经过WB，IP，IF，IHC实验。档发现浓度不够做IF，IHC时候，国外的抗体一般都是写未检测，国内的抗体一般是不写。所以尽量不要抱着试试的心里去尝试，往往只会浪费时间。你想啊，如果抗体能够做该实验，他们肯定会写上去啊。

做ELISA的抗体能否用来做WB?

通常用WB抗体稀释浓度为1:1000，IF/IHC为1:100，而如果可以做ELISA则可以稀释1:10000。如果一个抗体用来做ELISA的，那么言外之意就是该抗体效价不高。但不是说ELISA的抗体不能用于做WB，抗体说明书提示做ELISA稀释比例为1:1000，那么你可以试试1:100做做WB。

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来源: Super Lab

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