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患者男，48 岁，「头痛伴发热 1 周，言语混乱 1 天」于 2024 年 2 月 19 号入院，患者一周前不明原因出现头痛，伴发热，无咳嗽，咳痰，咽痛等不适。起病来无明显头晕视物旋转等。未予以特殊诊治。入院前出现言语混乱，烦躁不安，不能辨人，来我院急诊收治入院。患者睡眠较差，二便如常，体力下降，体重无明显变化。既往史：2 型糖尿病、糖尿病肾病、胃溃疡伴出血、痛风、支气管哮喘。实验室检查：脑脊液淡黄色，白细胞升高（106×10^6/L），以单个核细胞为主；CSF-GLU 0.3 mmol/L，CSF-LDH 79 U/L，CSF-PR 140.7 mg/dL，CSF-cl 126 mmol/L。HIV 阴性，CSF-TB DNA 阴性。脑脊液 10000 rpm 离心后取沉渣接种沙堡弱培养基，并进行墨汁负染和荧光染色。墨汁负染镜下可见大量圆形的酵母样细胞，其外周有一层较厚的荚膜。菌体内有一个或多个反光颗粒。部分菌体可见出芽。 墨汁负染镜下可见大量发亮的荚膜，内有出芽菌体（×400） 钙荧光白染色可见大量酵母样真菌（×400） 吖啶橙染色可见大量酵母样真菌（×400） 取离心后上清和患者血清进行隐球菌荚膜多糖抗原检测，结果显示脑脊液和血清均呈强阳性，且滴度为 1:2560。沙堡弱培养基 35 ℃ 培养 48 h 后取白色乳酪样菌落，用梅里埃 VITEK MS 全自动快速微生物质谱进行鉴定，结果为新型隐球菌，置信度 99.9。挑取培养 48 h 的菌落用梅里埃比浊仪调整菌液到 0.5 麦氏浓度，取 20 微升菌液加入到 ATB F2 培养基中，充分混匀加入到 32 孔药敏板（Fungus 3），35 ℃ 培养 72 h，通过与生长对照孔比较，根据每一孔的生长情况判定MIC值。隐球菌目前无临床折点，只有流行病学临界值（ECV）, 根据 ECV 值判为野生型或非野生型。野生型 (WT）: 对检测的抗真菌药物无获得性耐药机制或无敏感性降低的生物型；
非野生型（NWT）：对检测的抗真菌药物具有推测的 / 已知获得性耐药性机制或敏感性降低的生物型。2 月 21 号：头痛伴发热，考虑颅内感染，完善腰穿，脑脊液压力 270 mmHg，脑脊液生化表现为高蛋白、低糖，脑脊液常规白细胞升高且以单个核细胞为主，脑脊液结核杆菌阴性，颅脑和肺部 CT 无异常。2 月 23 号：脑脊液提示隐球菌，考虑隐球菌感染，抗真菌治疗，静脉注射两性霉素 B 60 mg/d。2 月 26 号：诊断为新型隐球菌脑膜炎，行鞘内注射两性霉素 B 2 mg 治疗。2 月 28 号：继续给予抗真菌、脱水降低颅内压、维持水电解质平衡、抗炎、止痛等对症治疗。3 月 6 号：患者头痛明显好转，全身感觉无明显异常，继续抗真菌、补液、降糖等对症治疗。新型隐球菌是一种带有厚荚膜的腐生寄生性酵母样真菌，为隐球菌中的主要致病菌。鸽粪是最重要的传染源，致病途径主要是通过吸入新型隐球菌孢子。该病预后不良，死亡率较高 [3]。新型隐球菌病是一种伺机性真菌感染症，在正常健康成人或是免疫力低下的病患均可出现，其中大部分病患都具有潜在性疾病，比如恶性肿瘤、其他肿瘤、AIDS、糖尿病、器官移植或大剂量使用糖皮质激素的病人为本病的高危险人群 [4]。另外对没有明显免疫功能缺陷者，尤其是年龄大于 40 岁以上的男性，有时也会发生全身性隐球菌病。该例患者有鸽粪接触史，HIV 阴性，即往有糖尿病合并糖尿病肾病，免疫受损与接触鸽粪与这次感染存在很大关联。新型隐球菌可以感染人体的任何组织和内脏，其中最常见的感染部位是中枢神经系统，会引发新型隐球菌性脑膜炎；其次是肺部，将导致肺隐球菌病 [5]。根据主要感染部位的不同，可分为中枢神经系统新型隐球菌病、肺新型隐球菌病、皮肤新型隐球菌病、骨骼关节新型隐球菌病及全身性新型隐球菌病。墨汁染色和荧光染色涂片镜检是常用的简便方法。无菌体液标本离心后取沉淀、痰和脓标本则可直接检查。墨汁染色：其外有宽厚的荚膜即可做出诊断。隐球菌培养是确诊隐球菌病的「金标准」 [6]。在 25~37 °C 环境下新型隐球菌均可生长，于沙氏琼脂及血琼脂培养基上，生成酵母型菌落，呈较大球形，直径约 5~20 μm。起初呈白色，1 周后转为棕黄、湿润、粘稠样。利用免疫学方法，在乳胶颗粒上吸附隐球菌抗体，待检样本存在隐球菌荚膜多糖抗原时可发生特异性凝集反应。根据现有文献报道，该方法的敏感度及特异度可达 90% 以上，已经作为隐球菌性脑膜炎确诊的依据 [7]。检测新型隐球菌最简单的方法，就是墨汁染色和荧光染色，可以直观的看到该菌，在这个案例中简便快捷的方法在诊断中起到了非常重要的作用，让该患者能够及时的得到有效的治疗。所以我们微生物人员要把这些手工方法牢牢掌握，不管检测方法如何高速发展，显微镜不能丢。另外除了基本功的掌握，也要学习新的方法，不断学习，更新自己的知识库，结合起来才能更好的为临床服务。指导老师：胡志敏 副主任技师 武汉市第一医院检验科微生物室[1] WT/T 421-2013 抗酵母样真菌药物敏感性试验肉汤稀释法标准。[2]Global guideline for the diagnosis and management of cryptococcosis: an initiative of the ECMM and ISHAM in cooperation with the ASM[3] 周少波，洪小兰，蔡媛媛，曹香香。新型隐球菌感染的临床分析和药敏试验 [J]. 新疆医学，2023,53 (5):570-572,597.[4] chustre J，Brion J P，Quetant s，et a1．Favorable evolution 0f cryptococcal menin 一 gitis in the context of flucytosine resistance [J]．Exp clin Transplant，2018，16 (1)：110—113．[5]Alexis C，Gushiken MD，Kapil K．et a1．Cryptococcosis[J]．Infect Dis Clin N Am，2021，35：493—514．[6] 黄赛林，阮子强，向璇。探讨新型隐球菌脑膜炎不同检测方法的诊断价值 [J]. 实验与检验医学，2019,37 (4):610-612.DOI:10.3969/j.issn.1674-1129.2019.04.015.[7] 季淑娟，倪玲红，张俊丽，等。不同荚膜抗原检测方法对隐球菌脑膜脑炎诊断和疗效评估的价值 [J]. 中华医学杂志，2015，95 (46)：3733-3736.
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