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肺孢子菌检测方法:轻松get,一文就够!

归去来兮 2024-1-11 05:44 PM 750人围观 技术

01

肺孢子菌感染的高危人群


在西安区域医学检验中心临床微生物实验室与各级医疗机构的合作中,不时需要使用六胺银染色进行检测。要了解六铵银染色的重要性,先要了解一下该染色方法的唯一主角:肺孢子菌


它是个“找软柿子”捏的“坏家伙”,常侵犯肺部,引起肺孢子菌肺炎(pneumocystis pneumonia, PCP),这是一种多发生于免疫功能受损人群的感染,CD4+细胞计数较低的HIV感染者发生PCP的风险最高,也可发生于造血干细胞移植、实体器官移植、血液肿瘤患者以及接受糖皮质激素、化疗药物和其他免疫抑制剂的患者。


对这些“弱势群体”来说,若感染肺孢子菌可谓是雪上加霜,临床的及时发现和及时诊疗显得尤为重要。


02

六胺银染色实验原理


标本经高碘酸氧化后,使真菌和其他机会性生物的细胞壁内的粘多糖暴露出醛基,醛基将六胺银还原为黑色的金属银,硫代硫酸钠对已显色的银盐起固定作用,并除去未反应的银离子。



1、六胺银染色操作步骤



  • 打开水浴锅,温度62℃(水浴箱内确保有足够的水量);


  • 工作液配制 :干净的试管加入200ul硝酸银溶液和3ml六次甲基四胺溶液,充分混匀,然后加至硼砂溶液中混合成工作液(这个步骤的配制顺序很关键,必须按顺序配制,这也是我们前期染片效果不好总结出来的经验教训)。如肉眼见少许透明颗粒属正常现象,无需过滤。(一份工作液8.2ml,可染8张片。配置好的工作液若不能及时用完,需避光保存放置2-8℃冰箱,并限一个月使用完。加热后的工作液只限使用一次);


  • 挑取标本制成涂片,自然干燥后加热固定


  • 滴加高碘酸溶液氧化15min,蒸馏水冲洗;


  • 将玻片放入染色玻片盒内,加1ml的工作液,将染色盒置于水浴锅中使染色盒漂浮于水面上,盖上盖子。常见的真菌染色10-15min,肺孢子菌染20-25min,见标本有黄棕色反应后,取出,(注意:工作液不能接触到金属离子,请确保水浴箱的温度到达62℃,且染色过程中切勿使染液干涸,染色过程中,可显微镜下观察,如果着色不够深,可延长染色时间或再重复此步骤);


  • 玻片取出待冷却后流水冲洗;


  • 滴硫代硫酸钠溶液处理3min,流水冲洗;


  • 用亮绿染液复染1min,流水冲洗,待干镜检。




2、送检要求及报告时效


用无菌容器送检痰液、肺泡灌洗液(优先选择)、肺部组织等进行检测。一个自然日可出报告。



3、结果报告


涂片镜检中看见菌体包囊壁呈黑色,呈“双眼皮样”、“括号样”或中心点状深染的形态,可报告:六铵银染色染色阳性(+)检见肺孢子菌。



4、质量控制


每次染色同时染一张质控片,质控片用ATCC10231白念株菌制备悬液后制成涂片,晾干后备用,根据质控片着色的深浅调整染色时间。







任何一位检验人,都拥有一颗福尔摩斯探案般执着的心,能帮助到临床的诊疗,特别是一些重症感染患者,能为他们争取到更多治疗时间,是我们每一位微生物工作者的终极目标。



来源: 检验医学网
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