紫外灯下的“暗箱”操作

作者 | 袁代莎

单位 | 贵州省妇幼保健院检验科

正处新冠爆发期，人心惶惶，我们用紫外灯来给外来的血样标本消消毒吧。紫外线的照射对皮肤的损伤想必众人知晓，但血样标本在紫外线的照射下发生了什么，却了解甚少。标本是检验工作的生命线。检验前标本的质量保证至关重要，尤其实验室内部对标本的质量保障。

据文献报告，70%的实验室错误出现在检验前^[1]。检验前不仅是指在临床，还包括标本到达实验室后至检测前阶段。因此，实验室的相关检测及检验结果的准确性至关重要,可较好地避免不必要的错误发生。

地中海贫血（简称地贫）是由珠蛋白基因突变或缺失导致的一种或多种珠蛋白肽链合成障碍引起的遗传性溶血性贫血，是临床上最常见的一种单基因遗传病。并且中重型地贫在经治疗后往往预后较差，此外该疾病存在遗传性，更是导致出生缺陷的主要遗传病之一。地贫基因检测采用PCR联合导流杂交技术对新生儿可疑阳性进行地贫确诊及分型。

12月15日实验像往常一样按标准SOP对新生儿血斑样本进行DNA提取、检测提取后DNA浓度、扩增及产物导流杂交等一系列操作。导流杂交显色后，部分结果未出（见图1）。编号为364及367，查看样本提取物浓度在可接受范围内（见图2），对结果未出的标本，将提取产物再次进行扩增和杂交，结果仍和最初结果一致，排除杂交问题。

图1

图2

12月22日对当日收到所有样本进行检测，同等条件下对364、367原血斑标本进行重新DNA提取、检测提取后DNA浓度、扩增、杂交，结果出，但新检测标本部分又出现同样情况，编号为373、377（见图3）。这种情况在本实验室从未出现过，因此本次检测结果未出需引起重视，一定是某个环节出错。

图3

围绕人机料法环5重奏进行分析，发现这两批标本唯一与往常不一样的是血斑标本在收到后，在超净台紫外灯照射数小时不等。当时大环境正处新冠爆发期，人心惶惶，检验人员收到样本后，首先是将样本进行紫外照射消毒，再进行检测。难道与紫外照射有关？那为什么重新提取复查结果又出了呢？紫外线照射后对DNA产生了什么影响呢?

有文献报道，紫外照射的DNA有损伤及自我修复，这一理论足能解释以上疑问。紫外线(ULTRAVIOLET LIGHT,UV )是一种有效的杀菌剂。紫外辐射引起DNA损伤的根本原因在于其能诱发DNA同条链内相邻的嘧啶碱基产生嘧啶二聚体^[2]，使DNA空间结构发生变化，从而阻碍了DNA复制、转录进而影响蛋白质的生物功能。

收到的血斑样本在超净台内随意放置，经紫外照射后受到不同程度的损伤，DNA空间结构发生变化，阻断了DNA的复制，所以影响其提取产物的扩增，导致部分检测样本失败。

血样标本经紫外照射损伤后，会启动紫外线修复酶系统，这是紫外线引起DNA损伤的主要修复酶，它能对紫外线引起的DNA损伤启动剪切性修复^[3]。这种DNA修复方式不需要光的参与，因此也被称为“暗”修复。第一次检测后的样本放于冰箱密封袋保存，待几日后再次进行复查，结果全部出的原因就可能在于紫外线修复酶系统的作用。

现代医学的迅猛发展，需要有更高标准的临床检验来满足临床的需要。分析前的质量控制影响因素甚多，所导致的误差占总误差的一半以上。分析前的质量控制从临床医生申请检验单开始，经患者的准备，标本的采集，运送到检验科直至分析开始时结束。检验工作者多数只关注了标本到达检验科前的质量控制，却忽视了到达检验科直至分析前的质量控制。检验工作者就连续两次地贫基因检测实验失败原因进行分析，旨在强调检验前质量管理的重要性，检验全过程的每一个环节都不容忽视。虽然此次实验最终结果出来了，但是实验室内周转时间明显延长，增加患者等待结果的时间，同时也增加复查概率、实验成本等。不管在什么样的紧急情况，尤其新冠疫情期间，检验工作者更要首先调整心态，保质保量的在一线完成检验工作。 

贵州省妇幼保健院检验科（新生儿疾病筛查中心）主任技师 厉勇

检验人员撰写案例的目的之一就是在不断重复的日常工作中发现出现的新问题，并找到出现问题的原因、解决问题的方法，从而达到优化实验流程、提高检验质量，保障每一份检验报告与临床的疾病诊断的高度一致性，为临床医生诊断、治疗等提供精准的依据；通过案例分析的方式呈现并发表，供同行们分享和参考。

本文文笔流畅、逻辑关系清晰、思维严密，更值得推荐的是在新冠病毒肆虐的这个时间段内，作为一名检验工作者，本着实事求是和对待工作一丝不苟的严谨态度，围绕“人机料法环”五方面，寻找出了引起标本检测失败的原因。

参考文献：

[1]张霞,周璐,王晓飞,等，临床检验标本不合格原因分析及改进措施[J],医学检验与临床,2021,32(6):60-62.

[2] Sancar A. Structure and function of DNA photolyase and cryptochrome blue-light photoreceptors. Chem Rev 2003;103(6):2203-2237.

[3] Wang Rui,Guo Zhou-yi,Zeng Chang-chun.Repair of DNA lesions induced by ultraviolet irradiation.Journal of      Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research .2008;12(2):348-352.

END