【冯仁丰】互换性依然是问题 4

三、铜蓝蛋白未被批准为ERM-DA470k/IFCC一个成分的原因^[2]

2013年Zegers等报告了新参考物质对铜蓝蛋白互换性的研究和证实。ERM-DA470k/IFCC是被制备替代ERM-DA470/IFCC（原CRM470）的。1993年发布的该参考物质以血清为基础，是14个蛋白包括铜蓝蛋白的参考物质。自此之后有相当多的报告认为它改善了常规临床实验室检测程序间对数种蛋白的一致性。但是该物质在制备和以后为各个蛋白定值的过程中没有被确认互换性。在以后的应用中，出现ERM-DA470不能使病人样品中的铜蓝蛋白结果实现一致性，因为它缺少互换性。

自新的ERM-DA470k正式发布以来，Zegers等为了更多了解铜蓝蛋白为什么不能被确定为该参考物质中一个确认的蛋白，按照CLSI的EP30-A文件进行了互换性实验。实验观察的结果大致如下。

1、初始决定铜蓝蛋白不是ERM-DA470k/IFCC中一个确认蛋白的原因。

开始在制备ERM-DA470k/IFCC替代ERM-DA470时，需要确认ERM-DA470k/IFCC的铜蓝蛋白浓度。当时定值中由13个实验室参与，使用了BN ProSpec、BNⅡ、Olympus AU640、Immage、Abbott、和LX-2200等检测系统，Hitachi使用了Roche和Dako试剂。这些检测均以ERM-DA470校准。对新鲜病人样品检测发现：Immage和Abbott方法得到高值，而Olympus、Roche、和Dako Hitachi方法给出低值。在还不能充分了解问题原因前，制备者作出了不列入铜蓝蛋白的决定。

2、互换性实验安排

被检测的人血清样品，有被添加了叠氮钠、储存于-70℃15个月的“陈旧”血清30份；也有新鲜的血清样品，即不添加任何防腐剂与深低温保存的。另外参考物质样品：1支ERM-DA470、3支冷冻干燥的ERM-DA470k/IFCC（12个蛋白的确认值）、3支深低温冰冻的ERM-DA472/IFCC（有CRP蛋白的确认值）。ERM-DA470k/IFCC和ERM-DA472/IFCC来自相同的处理过的混合血清，但保存方式不同。

有8个实验室使用不同检测系统参加实验。所有参与实验的各个检测系统依然使用ERM-DA470校准，对实验样品检测。

3、检测系统间比较

血清样品得到的不同方法检测结果均值CV为1.7%和6.1%。Pearson相关系数对所有配对方法比较均大于0.98，说明不同方法间结果有非常好的相关。但方法比较的斜率从0.56到1.42（表1）。这些值显示了相同血清样品的检测，不同方法间具有非常离散的结果。

注：表的右上角为评价ERM-DA470互换性的结果。表的左下角为Passing-Bablok回归的斜率。1为有互换性，0为无互换性。

5、EQAS数据。

Zegers还对2001~2008年间的英国的实验室间质量评估（UK NEQAS）的混合血清数据做了分析。这些下发的混合血清有储存于-70℃，有不加防腐剂、有加叠氮钠（1 g/L）、或Bronidox（1 g/L）。同一混合血清在第一次和最后一次的4~16个月间，分发2~3次。也有的是新鲜样品、和保存了不同时段后样品的结果。观察到下列趋势。

新鲜的EQAS样品，不同检测系统得到的结果间有系统偏移。

添加叠氮钠后冰冻储存的血清（文献中被称为“陈旧”血清），在检测系统比对中，与新鲜病人血清表现不一，但它们很像EQAS样品或像参考物质那样的表现。

Zegers认为检测铜蓝蛋白中参考物质ERM-DA470的表现很类似陈旧的病人样品。在陈旧ERM-DA470作为新鲜EQAS样品结果的溯源性基础时，方法间的变异很高。但陈旧ERM-DA470为陈旧（aged）EQAS样品提供溯源性时，方法间变异非常小。事实上，厂商已经用它将值转换给自己（in-house）和试剂盒校准品，造成了新鲜样品的检测系统间变异。但是对储存过的样品进行铜蓝蛋白的检测时，储存过样品内铜蓝蛋白的性质类似ERM-DA470；由EQAS分发这样样品的检测系统间变异非常低。所以，检测系统间变异在很大程度上可以由ERM-DA470缺乏互换性来解释。

发现新参考物质ERM-DA470k/IFCC表现像新鲜病人样品。

有提议认为，在储存中铜蓝蛋白结构的变化，导致抗原-抗体结合特性的改变。但是，需要做进一步研究才可全面理解因存放过程导致分子的改变。

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