血液样本采集和血涂片制作

一、血液生理概要

1.血清与血浆区别:血清缺少纤维蛋白原等凝血因子（I、II、V、VIII）

2.血液pH为7.35-7.45（动脉血7.4、静脉血7.35）

3.血液比密：正常男性约为1.055～1.063，女性约为1.051～1.060，相对黏度为4～5；血浆比密约为1.025～1.030；

4.血浆渗透量：正常人约为290～310mOsm/（kg·H20）。

5.血液特性：悬浮稳定性、黏滞性（纤维蛋白原、球蛋白）、凝固性。

6.血液生理功能：具有运输功能、协调功能、维护机体内环境稳定和防御功能。

二、采血方法

1.静脉采血法

①采血部位：肘部静脉（首选）、手背静脉、内踝静脉

②消毒应从内向外、顺时针进行消毒

③扎压脉带：时间应小于1min，＞2min会影响结果

④穿刺：见回血后立即去掉压脉带

⑤放血与混匀：取下注射器针头，将血液沿试管壁缓缓注入抗凝管中，轻轻混匀抗凝血避免溶血发生

⑥应避免同侧采血，间隔1h以上，影响结果

2.末梢采血法（方便快捷）

①采血部位：WHO推荐采集左手无名指内侧血液；婴幼儿可采集大趾或足跟内外侧缘。

②进行多项检查时，采血顺序依次为血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、血型鉴定

③采血不顺时不可用力挤压

④耳垂采血法已淘汰（结果不恒定，易受环境温度影响）

三、抗凝剂选择

1.乙二胺四乙酸（EDTA）：能与血液中钙离子结合成螯合物，使Ca2＋失去凝血作用，阻止血液凝固。Na盐溶解度低于钾盐。

2.草酸盐（双草酸盐）：与钙离子形成沉淀；草酸钾与草酸铵（血小板计数）按4:6混匀

3.肝素：与抗凝血酶结合，加强抗凝血酶（AT）灭活丝氨酸蛋白酶作用。可用于生化、红细胞渗透脆性试验、血气分析等项目

4.枸橼酸盐：能与血液中钙离子结合成螯合物，枸橼酸钠与血液的抗凝比例为1：9（凝血）或1：4（血沉）。可作为血液保养液

四、血涂片制备与染色

1.推片方法：手工推片法和厚血膜推片法（疟原虫）

2.瑞氏染料由酸性伊红和碱性美兰组成，溶解在甲醇溶液中，对细胞质成分染色较好

3.吉姆萨染液由伊红和天青组成，对细胞核、寄生虫染色较好

4.酸性环境中带正电荷多易与伊红结合、碱性环境中负电荷增多易与美兰结合

5.磷酸盐缓冲液pH为6.4-6.8（改变细胞所带电荷促进染色进行）

6.可用rA表示瑞氏染料质量规格

7.血涂片质量控制

①血滴大、角度大、推片速度快，血膜厚

②血滴小、角度小、推片速度慢，血膜薄

8.血涂片应观察体尾交界处，以红细胞为标尺