《ctDNA高通量测序临床实践专家共识》（2022年版）解读

ctDNA(circulating tumor DNA，ctDNA) 通常由肿瘤细胞主动分泌或在肿瘤细胞凋亡或坏死过程中释放入循环系统中的DNA片段，长度132~145bp，半衰期较短(一般<2h)。因其无创或微创、检测时间短、能够反映瘤内和转移灶异质性、可动态监测治疗疗效等优势而在临床得到越来越广泛的应用。ctDNA会携带来源于肿瘤细胞相关的遗传学特征，如基因突变、甲基化、扩增或重排等，可作为肿瘤筛查、伴随诊断、治疗疗效评估及预后风险分层的重要指标。然而，其丰度受多种因素影响，波动较大，在内外因素特别是治疗压力下，其携带的生物信息可能会发生演变，且受正常细胞胚系变异或克隆性造血细胞体系突变干扰，在临床检测和报告解读过程中应特别注意。

ctDNA NGS检测的建立与优化涉及分析前、分析中以及分析后的三个阶段多个步骤，实验室质量管理需贯穿 ctDNA NGS检测的整个流程。收集、样本处理和自动化过程应按照标准化和临床验证程序进行，最大程度防范因操作差异而引发的假阴性可能。样本采集建议采用含细胞稳定剂的抗凝管（如Streck采血管等游离核酸专用采血管）尽快完成血浆分离，提取的 cfDNA建议在24h内进行后续检测，否则，置于-30°C至-15°C下储存并避免反复冻融。ctDNA NGS检测应根据项目需求选择技术路线，可依据检测基因数量及覆盖范围大小选择不同测序策略。在进行基于 ctDNA的超高灵敏度突变检测时，建议使用分子标签技术和优化对应的生物信息分析设置，以降低由于测序平台随机误差导致的假阳性结果;建议通过建立测序噪音和克隆性造血背景库的方法降低克隆性造血及背景噪音带来的影响。

ctDNA NGS临床检测报告应包含受检者基本信息、样本信息、实验室信息、检测项目、检测结果及变异解读、检测方法的实验室内部验证结果、检测局限性及不确定性以及进一步检测的建议等内容。实验室应建立报告 SOP，建议根据国内外文献、共识指南、临床试验证据和实践对检出的肿瘤基因突变进行分类或分级报告。

临床研究表明，基于ctDNA NGS检测的bMSI(blood MSI)和bTMB (blood TMB)具有免疫检查点抑制剂疗效预测价值，但仍有诸多因素影响其在临床中的应用，如样本采集时间、检测panel基因覆盖范围、panel 大小、测序深度、生信算法及阈值设定等，未来还需开展更多的前瞻性临床研究。机器学习等人工智能算法不仅能降低假阳性、提高灵敏度，还能有效整合多维度的异质信息进行全面分析，大幅提高ctDNA数据效力，是ctDNA数据分析的主要方向。