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作者：张子科 单位：浙江大学医学院附属第一医院检验科 糖化血红蛋白（glycated hemoglobin A1c，HbA1c）是临床常用的血糖监测指标，可反映过去6-8周的平均血糖浓度，是糖尿病近期病情控制好坏的最有效和最可靠的指标。目前临床上检测糖化血红蛋白的金标准是离子交换高效液相层析法（HPLC），是目前精密度、准确度最高的方法，分析时间短，CV＜3.5%，在各地区医院和实验室得到广泛应用。 HPLC法检测糖化血红蛋白的参考区间为4%-6%，该值为百分比，分子是HbA1c，分母通常理解为总血红蛋白。成人血红蛋白通常由HbA（97%）、HbA2（2.5%）、HbF（0.5%）组成。 笔者在工作中发现，HPLC检测糖化血红蛋白的色谱图中只有6个条带（图1），分别是HbA1a、HbA1b、HbF、LA1c、HbA1c、HbA0，并没有HbA2，计算结果时是用HbA1c的面积除以这6个条带的总面积得出的百分比。所以对于糖化血红蛋白检测结果的分母到底是总血红蛋白还是以上六种血红蛋白，笔者一时有些疑惑，于是对这个小问题产生了一探究竟的想法。
图1 HPLC色谱图示 笔者首先查阅了教科书，人卫出版社2011年出版的第五版《临床生物化学检验》中明确指出：“无论何种检测方法都是糖化血红蛋白占总血红蛋白的百分比”（图2），但并没有详细介绍HPLC检测的内容，也没有提到HPLC色谱图条带是否包含HbA2这个问题。
图2 而人卫2015年出版的《临床生物化学检验技术》中并没有明确说明是占什么的百分比（图3），前后两个版本上的叙述上存在细微的差异。
图3
笔者通过检索文献发现，在徐岩、姚甜甜等“一种新型抗干扰高效液相色谱法血红蛋白分析系统”中，研究者通过改变三种洗脱缓冲液的洗脱时间，在色谱图中就能够清晰的看到HbA2被分离出来（图4），还可分离HbA1a、HbA1b、HbF、LA1c、HbA1c、HbA0，同时也能分离出变异血红蛋白(HbE/HbD/HbS/HbC)。 通过该色谱图，我们能看到HbA2是在HbA0之后的，而在普通的糖化血红蛋白检测模式中，HPLC色谱图的最后一个条带就是HbA0，无法确定在它后面洗脱出来的血红蛋白是被包含在HbA0条带内了还是被忽略了。
图4 于是我们又联系咨询了仪器厂家的高级工程师，工程师表示常用的检测模式无法将HbA2以及其他变异血红蛋白分离出来，所有这类血红蛋白都包含在了HbA0的条带里面了。该仪器如果采用地贫检测模式就可以将其分离出来，但地贫模式目前在国内没有上市。到这里，感觉走了一大圈，这个小问题在这里得到了简结明确的解答了。 为了进一步验证这一结论，我们在日常工作中找到了一例有HbD变异血红蛋白的患者，该患者初次就诊时，其糖化血红蛋白检测结果HbA1c为3.4%，异常的低，但空腹血糖为4.17ummol/L，属于正常范围，且病人近一两个月都没有低血糖的症状。其HPLC色谱图如下（图5），可以看到和正常图谱相比，HbA0明显增高（94.6% VS 89.5%）。
图5
为找到该异常结果的原因，我们对该血样进行了血红蛋白电泳，在电泳图中可以清楚的看到该患者存在HbD变异血红蛋白（图6），正是因为HPLC常规模式无法分离异常血红蛋白，将HbD直接归在了HbA0之中，导致图谱中HbA0的百分比异常增高，HbA1c结果则相对降低。
图6
通过这个案例的验证中，我们可以得出结论，在HPLC常规检测模式下，HbA2、HbD等血红蛋白不能被分离，它们都被归类于HbA0之中了。HPLC法检测糖化血红蛋白的结果确如2011版人卫教材中所述，是HbA1c占总血红蛋白的百分比。 |
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