七大方法消除引物二聚体！

我相信很多人听到引物二聚体都会生气，因为我们几乎每个人都被它折磨过。作为PCR的副产品，它有时是填充我们整个PCR实验过程的主要产物。当你被它折磨的时候，有没有想过为什么它总是出现在你的实验结果里？我觉得还是你不够了解，知己知彼百战不殆。当你足够了解它的时候，你就可以很容易地打败它，让它离开你。

接下来，就让我带你走进它的世界，认识它，了解它，最终打败它。

实际上，引物二聚体是引物本身3’端的碱基在Taq酶的作用下互补结合并从3’端延伸形成的一对引物或小分子量的双链DNA片段。

最根本的原因是引物之间或引物本身3’端碱基的互补组合。

模板数量太低

引物浓度太高

引物长度太短

低退火温度

循环周期太多

因为引物二聚体的大小从几十bp到几百bp不等，当你的目的条带分子量比较小时，电泳后的结果不一定是目的条带，很可能是引物二聚体，所以我们需要一种有效的方法来区分两者。在我们了解了引物二聚体形成的本质之后，就不难区分两者了。相信你看到这里已经知道引物二聚体形成的本质了，但是我想再强调一下，引物二聚体形成的本质其实是引物之间的部分互补结合，或者是引物本身的3’端区域。

也就是说，引物的形成不需要模板的参与，所以我们只需要在电泳时加入一组对照，就可以有效判断引物二聚体是否形成，如果形成，其分子量是多少，从而区分引物二聚体和目的产物。

这个比较就是:模板换成了H2O，其他都一样。在这种情况下，如果该泳道中有条带，则意味着形成了引物二聚体(当然，前提是系统没有被模板污染)。从这里也可以看出设置对比度的重要性。巧妙的对比往往能达到事半功倍的效果。

重新设计引物是解决这个问题最根本的办法：

增加模板的使用

降低引物浓度

引物长度适中

提高退火温度

减少循环次数

少量的甘油或DMSO可以适当地加入到混合物中。

最后，希望看完这篇文章，引物二聚体能永远离开你！