01 核酸检测是啥? 核酸检测即利用荧光 PCR 技术检测生物体核酸的过程。(PCR,全称为聚合酶链式反应)。 02 聚合酶链式反应又是啥? 我们在采集咽拭子的时候,只采集非常少一丢丢的液体。 然后看这非常少的液体里面有没有新冠病毒,如果没有或者非常少,就判定为阴性。里面如果病毒很多,就判定阳性。这是理想的情况。 但事实是,即使新冠患者,也不会体液里面密密麻麻都是病毒,可能就是非常稀松的分散着,也就是浓度很低。 浓度不高,就很难检测到,所以就想办法增加浓度。 如何增加浓度呢?就是利用 PCR 的手段。 PCR 技术能够利用特殊的酶在生物体外进行 DNA 片段复制,将特定的 DNA 片段扩增放大,从而达到能够检测的目的。 也就是让病毒的遗传物质翻倍,怎么知道翻了多少倍呢?用 Ct 值(循环数阈值)表示。如 Ct20,就是 2 的 20 次方倍;Ct40,就是 2 的 40 次方倍。 新冠病毒的核酸物质是 RNA,因此检测过程中首先要把 RNA 进行逆转录变成 DNA 后才能进行检测。随后由变性、退火、延伸三个基本反应步骤进行。 03 变性、退火、延伸又是什么? ➊ 变性:DNA 双链(模板)打开,变成单链 DNA; ➋ 退火:特定引物(DNA 小片段)与单链 DNA 互补配对结合; ➌ 延伸:单链 DNA 合成双链 DNA(半保留复制,在复制产生的两条子代 DNA 双链链中包含一条来自亲代 DNA 的单链和一条新合成的 DNA 单链)。 随后,重复循环以上三个步骤,获得更多的半保留复制链,成为下个循环的模板,从而使原始微量 DNA 模板特定区域得到指数级增加,放大几百万倍。 完成 1 个循环需要 1 ~ 2 min,整个反应时间 2 ~ 3 小时。 |