指南 | 如何保证加样的准确性

移液器虽然是一个简单的小设备，但它却是许多实验室操作的中心，是在很大的体积范围内吸出和分配大量液体的关键。

无论是基本的手动单通道，还是拥有各种功能的数字自动仪器，或是用于高通量工作的多通道，我们都依赖我们手中的移液器来最终获得准确的结果。

无论是仪器故障还是用户错误，移液准确性的失败都可能是许多问题的根源，可能导致错误的结果、污染，从而浪费了时间、样品和试剂。

在本指南中，我们将通过一些技巧和窍门来确保你的移液工作符合要求。

俗话说「工欲善其事，必先利其器」，移液器也不例外。一支被滥用、误用以及未经维修和校准的移液器不可能发挥其最佳性能或产生准确或一致的结果。

无论你是否有内部措施来自己执行或依靠合同服务供应商为你做这件事，确保所有的移液器都由经认证的人进行定期维修和校准。这将有助于确保仪器的顺利运行，去除潜在的污染物和准确的性能。

在日常使用中，确保移液器保持清洁，任何不慎溢出、溅出或吸出的液体都要及时彻底地清理掉，以避免仪器损坏或进一步的液体污染。

移液器是为在特定的体积范围内使用而设计的，这通常在仪器的某处标明。只能在其设计的范围内使用，否则会损坏仪器，导致后续使用时性能不准确。在范围之外使用也可能提供不准确的体积。

确保吸头与所使用的移液器型号兼容，并非所有特定尺寸的吸头都适合所有品牌和型号。

吸头应紧紧贴合，以形成良好的密封，并能准确吸出体积。但不要用力插入吸头，否则会损坏仪器并影响体积的准确性。

如果吸头是盒装或架装的，那么就不需要接触（可能会污染）你的吸头。如果需要的话，用力敲击并轻轻摇动，就可以将吸头紧紧地固定在移液器末端。

对于体积较大的移液器，吸头通常比较松散，从包装中取出吸头并将其固定到位时，注意只触摸离移液器最近的一端。

触摸吸头的另一端，然后将其浸入满满的试剂瓶中，这不仅会导致你的检测结果被污染，而且还会污染整瓶试剂，有可能会毁掉更多的检测结果。

如果您使用的是多通道移液器，请确保所有的吸头都牢固地、平等地固定在一起。

在多通道移液器上安装吸头时，很容易出现压力不均的情况，你可能会发现有些通道比其他通道更容易与吸头形成密封。如果你是第一次使用多通道移液器，不妨练习一下这个步骤，吸出一些有颜色的液体，看看你的仪器上的体积是否均匀。

吸液和分液的动作要平稳，移液器尖端要在样品的表面以下。突然的抽动会导致气泡被吸起，从而使吸出的体积不准确，并将液体拉到移液器桶内，导致污染。

同样重要的是，在吸液过程中确保移液器保持垂直。倾斜握持会影响吸液量，尤其是小容量的吸液。

当吸头内有液体时，同样重要的是不要倒置移液器，因为这可能会导致液体从吸头上流到移液器桶内。分液时，移液器应呈30~45度的角度，吸头应接触到接收管壁，并向上拉。

移液时尽可能让你自己处在舒适的使用条件下，因为这是实验室中重复性最强的动作之一。不良的技术和长时间的使用会导致人身伤害和准确性的丧失，所以要确保你的身体舒适，有支撑，工作所需的材料近在咫尺，并注意休息。

考虑你所移取的液体的粘度。虽然像水或磷酸盐缓冲盐水（PBS）这样的东西可以迅速吸出并分配，但液体的粘性越大，就越难通过吸头端的小开口。

当移取粘稠液体时，要缓慢而平稳地移动柱塞，并注意液体进入吸头的情况。与所有的移液操作一样，尤其是粘稠液体，过快或生硬的动作会导致吸出气泡，使吸出的体积不准确。

分注速度过快会产生液体的喷洒，因为液体会以其被强迫的速度努力从吸头末端涌出。这就造成了不准确的分配量，并可能导致周围区域的污染，包括使用者。

对于真正粘稠的液体，如100%甘油，移液可能不是一个现实的选择。考虑你是否可以用适当的溶剂稀释液体而不对你的实验产生不利影响。

移液器被污染的途径有很多，或者本身就会成为使用中的试剂的污染源。我们已经提到吸头处理和移液动作是两种潜在的污染途径。

这可能看起来很明显，但也要记住把吸头戴上，不要把管子直接浸入液体中，虽然这看起来十分低级和愚蠢，但很多人刚到实验室都会犯这个错误！

尽量不要将移液器吸头浸入试剂中太远，两者接触越多，污染的机会就越大。太远了，管子的一端也可能被淹没，污染了试剂和移液器。

取液体时，尤其是从深的试剂瓶或类似的容器中取液体时，要注意不要让移液管也接触到容器的侧面或颈部。这不仅会使移液器被瓶中的东西污染，而且会因移液器的转移而污染试剂。

从大瓶中取出等量的样品或将珍贵的样品放入较小的容器中使用，可以帮助缓解这一问题，并防止在发生污染的情况下完全损失。当使用多通道移液器时，建议使用一个槽来吸取试剂，以确保所有通道都能平等地接触到试剂，而不会有移液器接触到试剂瓶内的风险。

记得在不同的样品或溶液之间更换吸头，以防止通过吸头进行交叉污染。如果你认为你可能碰到了吸头或与某些东西接触，也要更换吸头，最好是谨慎行事。

使用过滤头可以帮助避免移液管内部的污染，同样也可以避免使用中的样品和溶液的污染。然而，如果使用得当，液体不应该到达滤头。滤头的湿润会影响性能，这是不正确使用或不良移液技术的一个指标。

当按下大多数移液器的活塞时，你会遇到两个阻力点。第一个阻力点是你在准备吸液时应该停止的位置。然而，在分液时，推过这个拳头点到第二个停止点，会迫使样品后的一点空气从吸头中流出，确保你得到每一滴样品，并且分出的体积是准确的。

但是要注意在松开活塞之前将吸头末端从液体中移出，否则一些样品会被重新吸回吸头中。在大多数数字移液器上，这一过程是自动进行的，但你仍然需要确保吸头在分液后与液体分离，以避免再次吸入。

在吸液和分液时，也要检查吸头外侧是否有游离的液滴。虽然液体不容易粘附在移液器吸头外面，但有些液体比其他液体更「粘」，偶尔会有液体粘附在上面。这可能会大大影响实际转移的液体体积，特别是如果一开始预定的体积就很小，这可能会对你的实验产生影响。

一般来说，你的目标是用移液器吸取均匀的溶液进行转移。因此，在用吸管吸取样品之前，要确保试剂或样品充分混合。这可以通过倒置、涡旋、轻轻摇动试管或上下移液几次来实现，特别是在体积比较小的情况下。

但要小心，因为有些样品可能是脆弱的，粗暴的处理或通过小的移液器尖端开口反复移液可能会对它们的状况造成损害。

另外，如果微粒在移液前已被收集在容器底部的颗粒中，而你的练习的目的是将液体部分从固体中去除，你希望达到相反的效果。

小心处理样品，不要干扰颗粒，当插入移液器尖端时，确保它不要离颗粒表面太近，因为一些固体也可能被吸入尖端，特别是当颗粒相当松散时。