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新冠疫情不断蔓延，核酸检测在疫情的防控中发挥着至关重要的作用。为了监测「提取、扩增」等环节，目前市场上已有多个产品均在核酸扩增试剂内加入了「内标」，包括「内源性内标」和「外源性内标」，两种方式各有利弊。 「内源性内标」的一个优势就是可监测「采样」[1]。这样的说法并不能完全囊括所有的临床场景；例如：在「单检」过程中，内源性内标仅能监测采集到足够人体细胞，不能判断采样部位是否正确；其次，在大规模「混检」中，标本漏检也难以发现。 因此，在实际工作中应根据实际情况，选择合适的试剂；并且无论使用哪种内标的扩增试剂，都需要保证采用过程的规范化。 「内标」、「内源性内标」和「外源性内标」是什么 在检验工作中，如 PCR 扩增靶标基因扩增呈现「阴性」，存在哪些可能性呢？ 可能受试者为「真阴性」，也可能是由于采样、提取和扩增阶段存在问题，导致的「假阴性」[2]。各个厂家为了减少「假阴性」的发生率，通过改变核酸扩增试剂的配置，可通过检测内标核酸是否「起线」，判断是否存在「采样、提取、扩增」导致的假阴性。 内标分为「内源性内标」和「外源性内标」，两者的分析比较如下表 [3]:
「外源性内标」可更好监测提取、扩增过程： 外源性内标是在扩增体系中的提前加入的「定量」核酸分子，扩增中 Ct 值的变化幅度较小（某产品内标 Ct 值为：30 ± 1），因此当外源性内标扩增 Ct 值明显变大时，提示核酸提取不足，或反应体系中存在抑制物等。 然而内源性内标是人体的管家基因，随着采集的人体细胞加入反应体系，扩增反应的 Ct 值较大时，可能的原因不仅包括核酸提取不足、反应体系中存在抑制物等，也可能是由于并未采集到足够的细胞。
扩增过程中，某样本内标的 Ct 值升高。 可能原因分析：
1 ~ 9 号样本 Ct 值：20.0 ~ 28.1
10 号样本 Ct 值：24.8
11~19 号样本 Ct 值：22.8~28.2
20 号样本 Ct 值：25.8
21 号样本 Ct 值：26.0 参考文献 [1] 关于进一步加强奥密克戎等新型变异株疫情防控工作的通知 [2]Estimating the false-negative test probability of SARS-CoV-2 by RT-PCR. Euro Surveill. 2020 Dec17; 25(50): 2000568. [3] Reference genes inreal-time PCR. J Appl Genet. 2013 Nov;54(4):391-406. |
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