检验医学中心开展艰难梭菌毒素检测说明

为临床诊疗需要，检验医学中心新增开展艰难梭菌毒素检测。新项目组合将于2018年9月启用，其样本送检要求、临床申请路径和艰难梭菌毒素检测的结果判读及临床意义如下：

一、 简介：

艰难梭菌（Clostridium difficile，CD）是革兰阳性厌氧产芽孢杆菌，其孢子在环境中可存活数月乃至更长的时间，是医院内感染和抗生素相关性腹泻最常见病原菌之一。

艰难梭菌主要通过粪-口途径传播，大多数产毒株因产生毒素A（肠毒素）和毒素B（细胞毒素）而致病，两种毒素分别由两个独立的基因tcdA 和tcdB 编码。毒素A 导致消化道内液体分泌增加、黏膜炎症和结构损坏。毒素B 通过干扰蛋白质的活性，调节肌动蛋白聚合，从而导致细胞骨架破坏，其毒力在胃肠道内的浓度几乎是毒素A 的10 倍，是导致感染的主要原因。一般情况下，艰难梭菌感染（Clostridium difficile infection, CDI）患者的恶化程度会因毒素量的增加而加重。

近些年，CDI在发病率、严重程度和复发率都呈不断上升的趋势，2013年美国已将艰难梭菌与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌感染作为三大医院获得性感染的主要病原菌。CDI 的临床表现呈现多样性，从轻、中度腹泻到暴发性甚至致命性伪膜性结肠炎、中毒性巨结肠、肠穿孔、败血症。严重感染者须行肠切除，甚至死亡。 

二、 诊断标准：

CDI 的诊断须结合临床和实验室检查，患者存在腹泻症状，且24h内腹泻3次或3次以上，并满足以下任一条件：（1）粪检出产毒性艰难梭菌或毒素阳性；（2）结肠镜或组织病理学示伪膜性结肠炎。

三、 检测方法：

为了给临床诊断艰难梭菌感染提供更加准确的依据，便于及时治疗，检验医学中心开展了粪便标本艰难梭菌毒素A&B的检测。

检测原理——第一步采用比较快速、敏感、经济的免疫学方法检测艰难梭菌表面表达的抗原性蛋白谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase, GDH）；第二步采用酶联免疫分析法或分子生物学法检测毒素A 和毒素B，以确保检测特异性。

检测仪器——采用梅里埃公司提供的全自动荧光分析仪（VIDAS），运用酶联荧光免疫分析技术（ELFA）对粪便标本中的艰难梭菌毒素A&B进行定量检测，协助诊断难辨梭菌相关疾病。

四、 标本采集及要求：

（1）标本：粪便

（2）量：固体便>200mg（火柴头大小）；水样便>200μl（常规吸管4滴）

（3）容器：普通粪便标本盒

（4）送检时间和要求：新鲜粪便，1小时之内送检

五、 检验结果：

根据检测值得出的结果解释如下：

谷氨酸脱氢酶（GDH）：

GDH为阴性者即未被艰难梭菌感染，不做毒素A&B检测

毒素A&B总量：