高效液相色谱常见问题与解答（下）

问题：NO.9

保留时间重现性差

当保留时间的偏差超过2%，可以认为保留时间的重现性差。对于某一个特定的分析，保留时间主要受流动相组成、流速、温度以及固定相影响，当保留时间发生明显变化时，应从这几方面入手。

A 由流动相造成的保留时间不稳定

B 由固定相造成的保留时间不稳定

问题：NO.10

峰形不理想

理想的色谱峰遵循正态分布，应该符合高斯曲线，是完美而对称的峰形；然而由于化合物性质的特殊性、色谱柱故障、操作条件等问题存在，峰形可能会不对称，前延或拖尾。

峰形前延

中药成分分析项目中，提取溶剂通常为乙醇、甲醇、乙酸乙酯等洗脱强度较强的溶剂，此时易发生“样品溶剂的洗脱强度远远超过流动相”的情况，为避免前延峰出现，可以用通过“流动相稀释提取液”或降低“进样体积”的方式。

峰形拖尾

问题：NO.11

鬼峰

鬼峰（Ghost peak）：是对未知来源的色谱峰的统称。

问题：NO.12

气泡峰

气泡峰是指携带气泡的流动相通过检测器时得到的响应值；这里的气泡可能是流动相中释放的空气，也可能是有机相遇水放热而会释放的有机溶剂分子；气泡峰往往具有较高的响应值，区域宽度仅为数秒，出峰时间和相应值比较有规律（如下图）。通常只有光谱型检测器才会出气泡峰。

解决办法：
  脱气。使用多元梯度时，对每一种组分进行脱气，排除它们溶解的空气；对于预先混合的溶剂，混合后脱气，排除溶解的空气和因放热而挥发出的有机溶剂分子。

前面的脱气方式对于预先混合好的混合溶剂，基本可以达到消除气泡峰的目的；但对于多种纯溶剂在仪器中混合的情况，混合后溶剂体系放热，存在潜在的气泡，当流动相流出色谱柱时，压强骤减，潜在的气泡溢出，被检测器检测到。为了防止这一问题出现，应在检测器出口连接一段内径较细的管路，使流动相通过检测器时，环境压强较高，气泡难以溢出，可以避免气泡峰出现。