高效夜宵液相色谱法时1964年-1965年开始发展起来的一项新颖快速的分离分析技术。它是经典液相色谱法的基础上,引入气相色谱的理论,在技术上采用了高压、高效固定相和高灵敏度的检测器,使之发展成为高分离速度、高分辨率、高效率、高检测灵敏度的液相色谱法,也称为现代液相色谱法。 古典液相色谱的致命弱点是柱效低、分离时间长,难以解决复杂混合物的分离,与气相色谱比较有很大的差距。从色谱的速率林论知道,要提高柱效,就要把固定相的颗粒减小,同时要加快传递的速率:要缩短时间就要把流动相的速度加快。因此要客服古典液相色谱的缺点,就必须针对这些问题进行研究。采取的措施就是要研制出粒度小,传质缩率块的固定相;使液相色谱柱达到柱效高、分析时间短、灵敏度高的效果。下图为两种方法的比较: HPLC月GC的比较 HPLC是在GC告诉发展的情况下发展起来的。他们之间的理论上和技术上有许多共同点,主要有1色谱的基本理论是一致的2 定性定量原理完全一样3均可应用计算机控制色谱操作条件和商铺数据的处理程序,自动化程度较高。 由于HPLC的流动相是液体,二液体的粘度比气体大100倍以上,扩散系数比气体小,故溶质分子与液体流动相之间的作用力不能忽略,致使HPLC与GC有一下差别 流动想差别: GC用气体做流动相,气体与样子分子之间作用力可忽略,而且,载气种类少,性质接近,改变载气对柱效和分离效率影响小,HPLC以液体做流动相,液体分子与样品分子之间的作用力不能忽略。而且液体种类多,性质差别大,既可以是水溶液,又可以时有机溶剂;既可以是极性化合物,又可以时非极性化合物,可供选择范围广,是控制柱效和分离效率的中药因素之一,使HPLC除了固定相的选择外,增加了一个可供选择的中药的操作参数。 固定相差别 GC固定相多事固体吸附剂和担体表面涂渍一层高沸点有机液体组成的液体固定相及今年出现的一些化学键合组。GC古兴祥粒度粗(一般为100-250um)、吸附等问线多事非线性的,但成本低。HPLC固定相大都是新型的固体吸附剂,化学键合相等,力度小(一般为3-10um),分配等温线多事线性的,峰形对称,但成本高。样品容量比GC高,分析型色谱柱zui大容量可达50mg以上。 使用范围更广 GC一般分析沸点500℃以上,相对分子质量少于450的物质,而对热稳定性差,易于分解,变质及具有生理活性的物质,都不能用升温气化的方法分析。因此GC只能分析占有机物总数15-20%的物质 HPLC在温室或接近室温条件下工作,可分析沸点在500℃以上,相对分子质量在450以上的有机物质。这些有机物质占总数的80-85%。HPLC的使用范围远远超过GC。 原理和结构差别 高效液相色谱仪和气象色谱仪在原理和结构上亦有很大差别。高效液相色谱仪具有高压输液系统,其检测器的检测原理和机构与GC有较大差异。 应指出,高效液相色谱和气相色谱各有所长,互相补充。在HPLC越来越广泛地获得应用的同时,GC仍然返回这他的重要作用。 |