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自身免疫性疾病 （autoimmune diseases，AID）是由于免疫耐受平衡被打破，自身免疫反应导致组织器官损伤和相应功能障碍为主要发病机制的一类疾病，它受遗传、环境等多种因素的影响，临床表现多样，以皮肤、关节、血管及多系统损害为主，伴有免疫功能异常。抗核抗体(antinuclear antibody, ANA)是针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称，现在对ANA 的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称。ANA是自身免疫性疾病的重要标志物，在AID的诊断、治疗和预后判断等方面具有不可替代的作用[1]，也可用于多种自身免疫性疾病的筛查[2]。检测ANA的标准方法是间接免疫荧光法（In-direct immunofluorescence,IIF）[3]。IIF 法虽然检测的抗原广、敏感度高，但不具有疾病特异性，难以实现自动化、标准化[4]。目前本室采用的是 ANA马赛克间接免疫荧光法，试剂盒来源于德国欧蒙公司，专用于体外检测人血清或血浆中的ANA。 每个反应区同时有2种抗原基质 :猴肝组织和 Hep-2细胞（图1、图2）。 在第一次温育时, 分别将 1：100和1：1000稀释的血清与固定在载片反应区上生物薄片中的 Hep-2细胞和灵长类肝脏组织反应。如果标本阳性，特异性 IgA、IgG和 IgM抗体与相应核抗原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模型。Hep-2细胞及猴肝组织均无特异性荧光为阴性。Hep-2细胞和猴肝组织产生明显特异性荧光为阳性，比较两种基质产生的荧光模式可进一步对 ANA进行分型，荧光较暗核型不易区分者为弱阳性[5]。图1 胞浆纤维型在Hep-2、猴肝组织细胞镜下视野ANA谱（IgG）抗体谱检测则与 IIF 法不相同，其特异性和自动化程度均高，但针对的抗原谱窄[6]。目前本实验室采用欧蒙印迹法，试剂盒由德国欧蒙公司提供，用于体外定性检测血清或血浆中的人抗nRNP、Sm、SSA、Ro-52、SSB、SCL-70、PM、Jo-1、CB、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、RIB、M2等 15种不同抗原 IgG类抗体，检测膜条上平行包被了这些高度纯化的抗原。 第一次温育时，经 1：101稀释的患者血清与膜条上的抗原反应，如果样本阳性， 特异性的 IgG与相应的抗原结合。为检测已结合的抗体，加入酶标抗体IgG(酶结合物)进行第二次温育，然后加入酶底物，以产生可观察的颜色反应，在欧蒙提供的软件上进行分析[5]（图3）。经统计，ANA核型阳性率最高的是颗粒型，其次是均质型、混合型和胞浆颗粒型等，其分布如下：核颗粒型、均质型、混合型（多为核颗粒+核均质型）、胞浆颗粒型、核仁型、着丝点型、胞浆纤维型、核点型及核膜型[2]。间接免疫荧光法检测ANA，因其基质中含有完整的抗原谱 (如细胞核和细胞质抗原), 可检测到几乎所有的ANA。如果存在ANA，就会在细胞中抗原相应的位置出现荧光反应，产生特征性的荧光模型，有一定临床参考价值 [7]。某种荧光模型常伴有特定的ANA谱，目前发现抗 nRNP/Sm、抗 Sm抗体、抗 SSA抗体、抗 SSB抗体等存在时荧光模型为核颗粒型;抗dsDNA、抗核小体抗体和抗组蛋白抗体为核均质型;细胞质中抗核糖体 P蛋白抗体为浆颗粒型[ 8]。经研究发现，抗nRNP抗体及抗Sm抗体主要在核颗粒型出现；抗 Ro-52抗体主要在核颗粒、核均质和胞浆颗粒中出现，抗 SSA、抗 SSB也主要在上述三种核型中出现;抗 dsDNA、抗组蛋白、抗核小体抗体主要在核均质类型的荧光核型中出现。抗着丝点抗体对着丝点核型的诊断具有特异性[5].但在 ANA的核型与各抗体的关系方面，各抗体类型同ANA荧光核型之间没有绝对的规律可寻[9]，尽管荧光染色模型具有一定的提示作用，但一种自身抗体可以出现不同的荧光染色模型，不同的自身抗体也可以出现相同的荧光染色模型，仅根据荧光染色模型特点来推断自身抗体的特异性是出现错误判断的重要原因，所以不能简单的依据荧光核型来推断相应的抗体的具体类型[5]。经统计，女性与男性ANA阳性率之比为1.92:1，女性ANA阳性率高于男性。从年龄组统计来看，21～50 岁年龄组和>50岁年龄组的ANA 阳性率均较≤20岁年龄组高，前两组ANA阳性率分别高于与≤20岁年龄组，存在统计学差异。结果提示女性比男性、20 岁以上人群比 20 岁以下人群患AID 的可能性更大。这可能与雌激素水平和代谢有关[2,6,10]。经统计，类风湿关节炎（RA）患者血液中可以检出抗 ds DNA、抗 SSA、抗 SSB 和抗组蛋白抗体,系统性红斑狼疮（SLE）患者体内可以检出nRNP、抗Sm、抗 dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗核小体、抗组蛋白和抗Rib-P抗体，干燥综合征（SS）可检出抗SSA、抗SSB和Ro52抗体，混合性结缔组织病（MCTD）可以检出nRNP、抗 dsDNA、抗SSA、抗SSB、抗Scl-70、抗组蛋白和抗Rib-P抗体,原发性干燥综合征（PSS）可以检出抗Scl-70 抗体[10,11,12]。虽然各种自身免疫性疾病都存在一些对疾病诊断具有高度特异性的抗体，但对于同一疾病在不同时期，出现的抗核抗体也不同，且同一抗核抗体可出现于不同的自身免疫性疾病中，所以抗核抗体及抗核抗体谱的检测仍不是自身免疫性疾病诊断的特异性指标，还要结合其他检测方法联合检查。荧光法是对抗核抗体检测的一个初筛实验，而免疫印迹法对抗核抗体谱的检测则基本能确定抗核抗体所针对的某种抗原，从而为自身免疫性疾病的诊断、分型、治疗和预后判断提供重要的依据，所以工作中应该将抗核抗体和抗核抗体谱联合起来共同用于自身免疫性疾病的诊断[13]。[1]Meror Ii PL,Schur PH.ANA screening:an old test with new recommenda-tions[J].Ann Rheum Dis,2010,69:1 420-1 422．[2]巫志宇.1708例自身免疫性疾病抗核抗体与抗ENA抗体联合检测的结果.免疫学杂志.2013,29(12):1067.[3]Peterson LK,Wells D,shaw L,et al.Novel method for quantitative ANAmeasurementusingnear-infrared imaging[J].J Immunol Methods,2009,349:l-8.[4]Kivity S，Gilburd B，Agmon-Levin N，et al． A novel automatedindirect immunofluorescence autoantibody evaluation． ClinRheumatol，2012，31(3)503-509．[5]张健.抗核抗体核型与抗核抗体谱3（IgG）相应抗体的关系研究.中华临床医师杂志,2011,5(1):221.[6]朱华强.5590例临床血清标本抗核抗体检测结果分析.中国热带医学, 2014,14(01):89[7]吴东海.风湿病的实验室检查.中华内科杂志, 1998, 37(5):353.[8]王兰兰.自身抗体检测的应用与质量保障原则.中华检验医学杂志, 2005, 28(10):987-990.[9]魏方.抗核抗体与抗 ENA抗体的相关性分析.实验与检验医学, 2009, 27(1):61-62.[10]周莲.抗核抗体和抗核抗体谱联合检测诊断自身免疫性疾病的临床价值。海南医学，2016,27（18）：2965.[11]武彩红.抗核抗体谱的检测在临床应用中的研究进展.标记免疫分析与临床，2014,21（2）:119.[12]许渊.抗核抗体谱在自身免疫性疾病中的临床应用.检验医学与临床，2012,9（8）：945.[13]李艳，孙家祥，鄂建飞． 1725 例血清抗核抗体及抗核抗体谱检测结果分析． 西部医学，2012，24(3):584-585 |
