荧光原位杂交知多少？—第二篇<工欲善其事，必先利其器> ...

二、工欲善其事，必先利其器

目前市场上在售的FISH探针，颜色各不相同，那是因为标记的荧光素各不相同，主要的有以下几种：

 荧光想被看到，需要被特殊光源激发后通过合适的滤光片才行，所以，探针生产商会在说明书上标明自己生产探针所使用的荧光素种类，然后建议“顾客使用探针前向滤片组供应商了解所使用的滤片组的详细情况，以便选择与标记荧光染料相适应的滤片组”。选择合适的滤光片是非常重要的，毕竟我们通过观察FITC的滤光片怎么也看不见Cy3不是？

以常见的奥林巴斯BX53显微镜为例（其他品牌也差不多），它的滤光单元长这样：

上图中手里拿着的小结构就是已经装了盒的滤光片。用来观察FISH实验结果的荧光显微镜，通常至少安装有3组滤光片，分别用来观察橙色、绿色以及蓝色的荧光。滤光片可以单独安装，所以，实验室如果已安装了荧光显微镜，那么在开展了新项目包含了新的荧光素种类时，拓展一个相应的滤色片就可以。

荧光显微镜中，除了滤色片，激发光源也需要注意，目前大多数荧光显微镜使用的是汞灯作为光源，而汞灯是有使用寿命的。所以，用了一段时间后，激发出的光变的弱了，老师，您的显微镜不是坏了，只是汞灯老了，换个嫩的就行。

FISH实验中，主要的仪器除了荧光显微镜，还有原位杂交仪：

原位杂交仪承担了探针和样本变性以及杂交的重任，可以提供精确且均一的温度。

原位杂交仪不仅可以用来进行荧光原位杂交的实验，也可以做原理类似的其他标记物（例如地高辛）标记的原位杂交实验。