一、FISH探针是个啥? 荧光原位杂交技术(fluorescencein situ hybridization),简称FISH。是采用荧光标记的DNA探针,利用探针与被检测样本DNA碱基对的互补性,在探针与样本的DNA杂交后,通过荧光显微镜检测荧光信号而得出结果,从而检测细胞,组织样本中的染色体或基因异常。 首先,我们知道需要检测的对象是DNA,而检测目标DNA所用的工具是用荧光染料做了标记的DNA,能够被观察到,这个就是FISH探针了。 荧光信号最终需要被肉眼观察到,而肉眼的分辨率是有限的,所以FISH探针的大小一般都比较长一点,多数有几百个kb。由于本身这个特点,FISH探针适用于检测染色体的断裂融合或者大片段的扩增、缺失或者染色体数目的变化,而不适用于突变检测。 以最常见的HER2产品为例,设计原理如下: HER2基因位于17q11.2-q12,设计者把HER2探针标记为红色,使其能够覆盖HER2基因,同时,由于着丝粒相对保守,把相应位点标记为绿色作为对照。 设计者选择位点的差异以及工艺技术的差异则造成了不同探针敏感性和特异性的差异。【未完待续】 |