融合基因检测试剂盒支持NSCLC诊疗系列文献解读之技术选择与临床应用篇 ...

随着NSCLC驱动基因突变与相关靶向药物研究的发展，越来越多EGFR以外具有药物治疗的驱动基因进入了人们的视野，例如ALK、ROS1相关的靶向药物已经从一代的明星药物克唑替尼发展到了目前即将上市的二代、三代色瑞替尼、劳拉替尼等。有鉴于此，ALK、ROS1融合基因在各大指南中已经被推荐为NSCLC需要常规检测的靶标。

从检测对象而言，融合基因的检测对象是RNA，具有在样本中稳定性不高、容易降解等问题，因此检测难度较大。临床实践中，各类小样本如穿刺小标本、胸腹水、细胞积液等的检测难度更大。然而，此类标本占了所有病理样本类型的三分之一以上，在此类患者的样本中用可靠的方法进行融合基因检测重要性不言而喻。

从技术选择上，近几年，PQCC、EMQN等大型质控项目统计说明qPCR(ARMS)方法是历年肺癌EGFR突变检测的主流技术，并成为普遍共识。同时，对于ALK、ROS1融合基因检测而言，定量RT-PCR法也备受关注。

因此，本篇专门从微小样本选择RT-PCR法检测融合基因的可行性出发，结合相应前期处理指证、突变频率、临床患者数据等信息，为大家展现艾德RT-PCR融合基因检测产品在实际临床工作中的应用。

Detecting ALK, ROS1 and RET Fusion Genes in Cell Block Samples¹

本研究来自周彩存教授团队，在本研究中收集了含肺腺癌细胞的108例细胞学样本，并制成细胞蜡块。所有细胞蜡块评估下来，都含有近30%的肺腺癌细胞。在这些样本所属患者中，48例含有EGFR突变。在50例EGFR野生型患者中进行融合基因检测，14例ALK融合(28%)，2例TPM3-ROS1融合(4%)，3例KIF5B-RET融合(6%)。未发现一例双融合。统计发现，拥有融合基因突变的患者比不携带融合基因的患者要年轻(P=0.032)，但在性别和吸烟状态上并未发现明显不同(P>0.05)。在35例一线接受化疗的患者中，携带融合突变的患者比起野生型患者有更好的DCR(72.7% vs 50%,P>0.05)和ORR(9.1% vs 4.2%，P>0.05)。中位PFS方面，融合基因患者与野生型基因患者分别为4.0个月和2.7个月(P>0.05)。研究结论显示：细胞蜡块样本可用于检测非小细胞肺癌中ALK、ROS1、RET的融合。相比未筛选的NSCLC患者人群，EGFR野生型肺腺癌人群三个基因融合的频率更高。融合基因阳性的患者比阴性患者人群年轻，但他们在一线化疗中PFS没有显著的不同。

Malignant pleural effusion cell blocks are substitutes for tissue in EML4-ALK rearrangement detection in patients with advanced non-small-cell lung cancer²

本研究来自王洁教授团队，回顾性分析了109例NSCLC患者，探讨利用恶性胸腔积液(MPE)分析EML4-ALK状态的可行性，并评估MPE诊断的EML4-ALK分子状态的预后价值。样本检测经过艾德RT-PCR和其他多种方法确认，结果显示：共检出5例ALK阳性，同时有组织和MPE样本配对的共21例，符合率100% (21/21), 相比组织检测，胸腔积液检查的敏感度和特异性分别为 100% (2/2) 和 100% (19/19)，NSCLC患者EML4-ALK分子状态MPE检测可作为组织检测的一个补充方案。

并且这些ALK融合的患者对比EGFR突变和EGFR/ALK双阴性患者化疗效果上PFS表现出一定的延长(9.27个月 vs 6.53个月和4.67个月，P = 0.122)，提示MPE诊断EML4-ALK可能还具备治疗的预测价值。

Feasibility of cytological specimens for ALK fusion detection in patients with advanced NSCLC using the method of RT-PCR³

组织学标本是用于非小细胞肺癌ALK检测的首选样本类型。但病理取材中还有许多其他类型的样本值得利用。本研究来自周彩存教授团队，目的在于评估细胞学样本作为晚期非小细胞肺癌患者ALK融合检测的一种补充样本的可行性。同济大学附属肺科医院晚期非小细胞肺癌患者以组织学或细胞学样本经RT-PCR法检测(厦门艾德AmoyDx试剂盒)ALK融合后纳入研究组。ALK融合阳性患者接受克唑替尼治疗的患者，并做疗效评估，共计1,274例患者纳入研究。结果显示：其中108例患者RT-PCR检测ALK阳性，并且69人接受了克唑替尼治疗。而其中1,002例患者收集到细胞学样本，提取RNA后评估质量：平均浓度为60.99ng/μL(95%CI，55.56-66.60)且ALK融合发生率为8.3%(83/1002)，总体接近组织学标本人群RNA平均浓度63.16ng/μL且ALK融合发生率为9.2%(25/272)。

另外比较疗效发现，细胞学样本阳性患者与组织学样本阳性患者接受克唑替尼治疗后的ORR(62.0% vs 42.1%，P=0.177)和中位PFS(8.6个月vs 7.0个月)没有显著差异。

研究指出，细胞学样本在检测ALK融合基因状态方面表现出很高的可行性，可以作为RT-PCR法检测晚期非小细胞肺癌ALK融合用一个很好的样本。研究还探讨了细胞学不同亚组样本的特性，如皮下结节穿刺、胸水沉淀、细胞积液、腹水、支气管穿刺、痰液等，发现严格规范处理，以RT-PCR方法检测ALK融合基因均有良好表现。

参考文献：

1、Transl Oncol. 2014 Jun 17;7(3):363-7

2、Cytopathology. 2016 Dec;27(6):433-443.

3、Lung Cancer. 2016 Apr;94:28-34.