EML4-ALK融合基因的检测方法

   上图为通过免疫组化染色检测ALK蛋白表达在四例腺癌中的情况。

A） ALK完全负染色；

B） 强（3+）染色ALK；

C） 强（3+）染色ALK；

D） 中度染色（2+）ALK；

目前，检测EML4-ALK融合基因的方法有很多种，其中原位杂交法中得荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）为FDA认可的检测方法，但此方法无法同时观察病变组织的形态结构。

而显色原位杂交法（chromogenicin situ hybridization,CISH）具有与FISH一致的检测敏感性、特异性及准确性，可以保留肿瘤组织的结构和形态，弥补了FISH无法观察组织学形态的不足。

免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）法是常规病理检测的主要方法，价格便宜，但灵敏度低，不能完全代替FISH方法来检测ALK基因的重排，可以作为基因的初步筛查方法。

RT-PCR方法检测EML4-ALK融合基因亚型的鉴别，但该方法需要高纯度的RNA，临床上病理组织由石蜡包埋，长时间放置会出现RNA降解，因此进行RT-PCR检测时最好用新鲜的肺癌组织。另外，EML4-ALK融合基因亚型比较多，需要设计多组引物。

   上图为采用RT-PCR方法检测EML4-ALK易位研究，显示了2种变异情况。

当然，新一代测序技术也是可以用于EML4-ALK的检测的。

参考文献：

[1] H Hatanaka. Identification of the transformingEML4-ALK fusion gene in non-small-cell lung cancer. 《Nature》, 2007, 448(7153):561-566.

[2] A Yoshida.Bright-field dual-color chromogenic in situhybridization for diagnosing echinoderm microtubule-associated protein-like4-anaplastic lymphoma kinase-positi...

[3] L Liu.Detection of EML4-ALK in lung adenocarcinomausing pleural effusion with FISH, IHC, and RT-PCR methods.《Plos One》, 2015, 10(3).