免疫组化中如何防止脱片

听到很多人抱怨，在免疫组化实际操作中遭遇过组织易脱片的问题，今天我将结合一些个人经验，与大家分享简单易操作的解决方法。

方法一：

使用防脱玻片，组织当然是越新越好。

方法二：

某些免疫组化染色时候，需要涉及多种抗原修复方法，如某实验需要双修复（热修复和酶修复），热修复相对来说是比较剧烈的（如放在 EDTA 中煮 1 min），沸腾的液体对组织还是有很大的冲击力的，此时组织容易脱，如果热修复放在酶修复后，则组织更容易脱，相反如果将不剧烈的酶修复放在热修复后，可以减少脱片的发生。

但很多时候知道这些似乎解决不了问题，不少研友们由于读研时间仅仅 3 年，重新收集新鲜标本显然不可能，回顾性研究中，某些病例比较罕见，活检取出组织也相对宝贵，且由于当时条件限制等多种原因造成如下问题：

1. 空白片少，经不起反复折腾；

   
   

2. 回顾性研究中不可能使用新鲜的切片组织；

   
   

3. 某些单位先前并没有使用防脱载玻片保留组织标本等。
   

   
   

这些给实验科研造成一些困境，以下是本人改良后的方法与心得（以无防脱的非新鲜组织为例，修复方式为热修复和酶修复），脱蜡、水化及后续染色等处理均按原先各自的实验流程处理，这里仅介绍如何防脱。

如上所说，先采用酶修复，后热修复，一般热修复是直接置于相应的修复液中煮沸，期间还有可能使用高压锅。

本人尝试如下改良（理论基础：抗原修复时仅需要组织与修复液接触，且只要薄薄的一层就能反应）。

改良一：

敞开高压锅盖，置一铁架于修复液面，其上放置玻片，玻片上滴加修复液体（铁架高度以沸腾修复液不会触及玻片为妥）。为了防止玻片上的修复液挥发，可在滴加修复液后盖上盖玻片，提供热源使修复液保持沸腾状态，使用热蒸汽加热。