T淋巴细胞表面标志的检测项目解读

参考区间

CD3⁺T细胞 (71.50±6.20)%；

CD4⁺T细胞 (45.70±5.30)%；

CD8⁺T细胞 (27.90±5.00)%

临床意义

1、T细胞是参与机体细胞免疫反应和在免疫应答中起主导调节作用的一组免疫细胞。T细胞是由一群功能不同的异质性淋巴细胞组成，由于它在胸腺内分化成熟故称为T细胞。成熟T细胞由胸腺迁出，移居于周围淋巴组织中淋巴结的副皮质区和脾白髓小动脉的周围。不同功能成熟的T细胞均属小淋巴细胞，在形态学上不能区分，但可以借其细胞膜表面分子的不同加以鉴别。在T细胞发育不同阶段以及成熟T细胞所处的静止期和活化期，其细胞膜表面分子表达的种类和数量均不相同。这些分子为抗原性不同的糖蛋白。它们与T细胞对抗原的识别、细胞的活化、信息的传递、细胞的增殖和分化以及T细胞的功能表达相关。它们也与T细胞在周围淋巴组织中的定位相关。由于这些分子在T细胞表面相当稳定，故可视为T细胞的表面标志，可用以分离、鉴定不同功能的T细胞。这些分子的单克隆抗体对临床相关疾病的诊断和治疗也具有重要应用价值。

2、所有的T细胞均有共同的标志性抗原，不同功能的T细胞亚群又具有各自的标志性抗原。检测人T细胞的特异性抗原，曾采用抗人脑、抗人胸腺细胞和抗人T细胞等抗血清，通过细胞毒试验或免疫荧光染色加以鉴定。自抗白细胞分化抗原的单克隆抗体问世以来，上述诸多方法均被新方法取而代之。常用以鉴定和计数T细胞的表面分化抗原，最常用单克隆抗体来鉴定和检测T细胞及亚群的表面标志。

3、淋巴细胞亚群的测定： 主要用于了解恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、重症病毒感染、自身免疫病等患者机体的免疫功能是否处于平衡状态。某种细胞亚群所占百分比过高或过低，都提示存在免疫功能紊乱，但一般情况下对疾病的诊断和鉴别无特异性。

4、总的CD3⁺T淋巴细胞百分数可以用来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病； T淋巴细胞上升多见于慢性活动性肝炎或慢性迁延性肝炎，器官移植排斥反应，重症肌无力，甲状腺功能亢进与甲状腺炎患者，霍奇金病。T淋巴细胞下降多见于恶性肿瘤，自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等；原发性免疫缺陷病，如先天性胸腺发育不全等、艾滋病；接受放疗、化疗或者使用肾上腺皮质激素等免疫抑制药。

5、CD3⁺ CD4⁺ 细胞百分比和绝对数、CD4⁺ /CD8⁺ 细胞比值在获得性免疫缺陷综合征( AIDS) 患者显著下降，常作为该病诊断、病情观察和预后判断的重要指标。应注意，CD4⁺细胞数和CD4/CD8比值的降低也见于一些恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、器官移植后发生排斥反应以及应用免疫抑制药治疗的患者。

6、用于白血病细胞免疫表型分析：在某些白血病，如T系急性淋巴细胞白血病，细胞CD2、CD3、CD4，CD5、CD8特异性表达。

7、了解Th和Tc淋巴细胞的百分数：有助于监测患有免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病或有免疫反应的病人的免疫状态，而Th/Tc的比值可以用来评价那些自身免疫失调或被怀疑是免疫失调或已知患有免疫缺陷的病人的免疫状态，此外，这一比值还可用来监测骨髓移植病人以免受到急性移植物抗宿主疾病(GVHD)的攻击。

8、CD4/CD8比值增高可由于CD4增高或CD8减少所致，见于某些自身免疫性疾病，如SLE、器官移植排斥反应；CD4/CD8比值下降是由于CD4细胞减少或CD8细胞增多所致，常见于：免疫缺陷病，如艾滋病的比值常小于0.5；使用免疫抑制药、恶性肿瘤、再生障碍性贫血、某些白血病、系统性红斑狼疮、某些病毒感染。

9、器官移植后免疫监测：CD4/CD8比值下降提示并发凶险感染，当<0. 2时，必须停用免疫抑制药； CD2+ HLA-DR+增加5%～10%，且不伴有CD25的增加，提示巨细胞病毒感染；CD25高于正常值5%～10%，表明即将或已发生排斥。在同种异体器官移植以后，肾功能稳定的患者可出现Th淋巴细胞下降，Tc淋巴细胞上升，而Th/Tc比值无明显变化。净化自身骨髓移植后表型重建期间可有Th细胞下降， Th/Tc比值下降。

影响因素

1、对荧光素标记抗体用量应做预试验，找到最佳抗体使用浓度。

2、每份样品检测的同时必须设置同型对照， 即用荧光素标记的正常小鼠Ig(Ig亚类与荧光抗体相同)与荧光素标记的抗CD单抗同时检测。在分析待测血样结果时应减去同型对照的阳性结果，或以同型对照管为阴性管。

3、有生物危害的标本在样品处理时应在生物安全柜内进行，上样前要用固定剂灭活危害因子或采用物理防护手段。

方法学

抗体致敏细胞花环法、免疫细胞化学法、免疫荧光法、特异性受体的检测、流式细胞术免疫分析方法等。

(1)抗体致敏细胞花环法：用相应的抗CD3单克隆抗体吸附于醛化的红细胞(致敏)，当其与受检细胞混匀后，结合有红细胞的单抗与待测细胞上的CD3抗原结合形成桥联，由于加入的红细胞多于受检细胞，阳性的受检细胞能与致敏的红细胞结合而形成玫瑰花样的花环，凡受检细胞周围黏附3个或3个以上红细胞者为花环形成细胞，计算花环形成细胞与总淋巴细胞之比进行定量分析。本法需要有相应的致敏红细胞试剂，受影响的因素较多。

(2)免疫细胞化学法：通常以酶作为抗体标记物，采用细胞酶免疫化学技术完成，并常采用生物素-链霉亲合素放大系统提高灵敏度。该方法可采用普通显微镜观察，凡着色的细胞即为相应CD抗原阳性的细胞，计算阳性细胞占总计数细胞的百分率进行定量分析。本法简便易行，不需特殊仪器，一般实验室均可采用。

(3)免疫荧光法：应用荧光素标记的抗CD单克隆抗体与分离得到的外周血单个核细胞(PBMC)结合（直接免疫荧光法）或荧光素标记的羊(或兔)抗小鼠IgG抗体(二抗)与已结合了抗CD抗体的PBMC结合(间接免疫荧光法)，在荧光显微镜下观察并计数。一般计数200个淋巴细胞，求出荧光阳性细胞与计数细胞总数之比，即为相应CD抗原阳性T细胞的百分含量。

(4)特异性受体的检测：T细胞表面有特异性绵羊红细胞(E)受体和T细胞抗原识别受体(TCR)，其中E受体曾被广泛用作鉴定和计数T细胞的标志。当人T细胞与绵羊红细胞悬液按一定比例混匀后，置4°C至少2h或过夜，T细胞表面的E受体能与绵羊红细胞结合而形成玫瑰花样的花环，取样涂片染色、镜检计数可得总花环形成比例，亦即T细胞的百分率。如减少淋巴细胞与绵羊红细胞的比例，两者混合后，经短时间的温育即行取样涂片镜检计数，仍可见部分淋巴细胞形成花环，称为活性E(Ea)花环，它可能代表T细胞的一个亚群，正常值仅为总E花环的1/3 ～ 1/2，或20%～40%。检测Ea花环形成细胞比检测总E花环形成细胞更能反映受检者的细胞免疫水平。类花环试验多种多样，因操作简便易行，曾被广泛使用，但影响因素较多，操作稍有不同，所得结果差异较大，因此渐被检测CD抗原方法所取代。

(5)流式细胞术免疫分析方法检测T细胞亚群：目前，检测T淋巴细胞最简便的方法是用流式细胞免疫学技术测定其表面标志物。T细胞主要测定细胞膜上的分化抗原簇(Cluster of differentiation. CD ) CD3、CD4、CD8。 CD3为所有T细胞的特有标志，CD4是辅助性T细胞(Th)的标志，CD8是杀伤性T细胞(Tc)的标志。

采用多参数标记的单克隆荧光抗体标记单个核细胞悬液，根据T、B、NK细胞的表面标志，用适当的荧光素标记特异性单克隆抗体与淋巴细胞反应，通过流式细胞仪测定，首先在淋巴细胞中识别出CD3⁺T细胞，然后在CD3细胞中再区分CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞，可分别得出CD4⁺T细胞 和CD8⁺T细胞占淋巴细胞的百分比和荧光强度，在应用绝对计数管时，还可得到待测样本中的细胞浓度。一般CD3⁺CD4⁺细胞为Th，CD3⁺CD8⁺为Tc，CD3^-CD19⁺为B细胞，CD3^-