新冠病毒PCR实验室污染处理心得——基层实验室与气溶胶污染斗智斗勇 ...

作者 | 冯涛  黑龙江省虎林市红十字医院检验科

审校 | 杨瑞锋  北京大学人民医院

随着新冠疫情进入第三年，“核酸检测”这个以前陌生而神秘的词汇，现在变得无人不知。笔者作为一个基层检验人员，本以为这辈子都和PCR技术无缘，没想到新冠病毒让我们相识、相知、天天相伴。对于刚接触PCR的检验医生来说，实验室污染是个绕不开的话题。

医院是在去年9月建成并投入使用了博科的PCR方舱实验室，提取仪和扩增设备分别由博科和乐普公司提供，PCR试剂为达安（红盒）。去年标本量一直不多，但今年新年伊始，按省里要求，边境城市需要5天一次全民核酸，标本量陡增，我们紧锣密鼓干到了春节前二天，却收到一份特别的“礼物”：室验室污染了，大多数样标本结果都是“阳性”，见下图，显然是出现了大面积的PCR污染。

(1)标本送到外院重新做，依然发现大量假阳性，考虑加样枪和生物安全柜、空调系统都有可能污染，更换加样枪和生物安全柜滤网，并打开实验室门和窗，放置多个电风扇加快空气流动。

(2)将所有开封的试剂、耗材扔掉。

(3)实验室内能移动的物品放到室外，试管架等耐腐的物品用有效氯2g/L的含氯消毒液浸泡半小时或喷洒，然后清水冲洗放置到室外。

(4)提取仪、扩增仪、生物安全柜等仪器每天用核酸消除剂喷洒并清洁干净。提取仪、生物安全柜每天打开紫外灯照射2小时。

(5)每个房间的6个面(包括屋顶和地面)用有效氯2g/L的含氯消毒液每天喷洒一次，半小时后用清水清洁干净。

(6)每天用有效氯2g/L的含氯消毒液空气消毒，后期买到甲醛后薰蒸。

(7)每天傍晚将采样管开盖置于各房间过夜，第二天收集并采集各仪器物表进行检测。

16天后，实验室污染彻底消除（见下图），恢复使用。

(1)实验室能在很短的时间内克服困难，开展大规模核酸筛查，勇气可嘉，但检测人员毕竟既往没有任何开展分子生物学检测的经验，对PCR的污染危害一时无法感同身受，污染的产生让大家猝不及防。

(2)八联管可能有时没有盖严导致扩增产物泄露(有人曾经发现PCR三区地上有八联管的盖，当时没有引起足够重视)。

(3)将八联管从传递窗传回二区扔到垃圾袋里。因为高压不能降解核酸，二区垃圾袋高压时反而可能使扩增产物或阳性质控以气溶胶的形式逸出，造成污染。

(4)每个步骤结束都用酒精清洁，部分检验人员误认为酒精能降解核酸、防止污染，从而降低了警惕性。

(5)因为我们这里冬天很冷，所以在方舱实验室的外面盖了带暖气的房子，没有考虑到方舱实验室的空气循环问题。

(1)通风可能是最重要的，但方舱实验室仅有传递窗，与门之间没有强力的空气流动，可以考虑借用工具增加空气流动，比如电风扇、鼓风机等。

(2)含氯消毒剂效果好，能够完全破坏新型冠状病毒核酸，并且效果与含氯消毒剂的浓度和作用时间呈正相关，而且经济、易得。盐酸虽然效果也很好，但因为腐蚀性强不建议用。

(3)市售的核酸消除剂较贵，另外注意，有些种类的核酸消除剂也有腐蚀性和生物安全危害，要及时清洗掉。

(4)紫外灯照射对300bp以下的扩增产物无效，荧光定量产物长度一般为80-150bp，所以紫外灯照射对新冠核酸没有太大作用。

(5)酒精能够杀灭病毒，但不能降解核酸，而且它还是核酸提取试剂中的一个组分。

(6)醛类、酚类、季铵盐等消毒剂虽然能杀灭病毒，但不能降解核酸，或降解效率较差，有的甚至可致基因突变等毒害作用，尽量不要使用。

若防疫紧急，需要在不能去除原有污染的情况下仍开展实验，可考虑使用另一品牌试剂盒，但前提是这个试剂盒的引物和探针与现有试剂完全不同。而大部分国内试剂商采用了大体相同的引物和探针设计，加上笔者实验室试剂由CDC统一配发，无法随便更换试剂，所以这一备选方案的实施有一定难度。

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