血小板生成素检测及临床意义

血小板生成素(TPO)，又称巨核细胞生长衍生因子(MGDF)。1958 年，调控血小板造血的因子首次被提出在人的体液中存在。到1994年， Sauvage等采用亲和层析法纯化了猪的TPO的受体c-mpl，才进一步揭示了TPO。此后，国内外对它进行了分离和克隆，对其结构、生物学活性及在临床疾病中的作用进行了大量研究，发现TPO在血小板疾病中应用意义重大。

TPO能特异性的刺激巨核系祖细胞增殖分化，促进巨核细胞成熟，还能强烈促进核细胞或巨噬细胞和红系祖细胞的恢复，有诱导造血祖细胞动员进入外周循环的作用。TPO主要产生于肝和肾脏。血清游离 TPO浓度是通过黏附因子表达在人外周血血小板和巨核细胞上的c-mpl 来调节。

人的TPO蛋白前体N端为21个氨基酸残基组成的信号肽，经水解后形成332个氨基酸残基组成的成熟TPO蛋白，分子量约为38kD。成熟的TPO蛋白含两个完全不同的结构域。一个是153个氨基酸残基组成的氨基末端结构域，与EPO同源（20％相同，还有25％相似），具高度保守性。与EPO一样，TPO在此区中也含有4个Cys，其中3个具有保守性，第一个和最后一个Cys组成一个二硫键，是维持TPO和EPO生物活性所必需的。对全长人TPO蛋白与仅由N端153个氨基酸残基组成的多肽进行生物活性对比，发现两者具有相似的生物活性，表明TPO蛋白的生物活性主要由其N端结构域决定。另一个结构域是178个氨基酸残基组成的羧基末端结构域，富含Ser、Thr和Pro，并具有6个潜在的糖基化位点，此区具有广泛的种属特异性，此区的功能与稳定和增加循环中的TPO的半衰期有关。

TPO的刺激作用是通过与巨核细胞上的TPO的活化受体结合，激活了细胞上的JAK/STAT、Ras/MAPK等信号通路，诱导包括Jak2、Stat5蛋白在内的多种蛋白的酪氨酸磷酸化，从而活化巨核细胞，促使其增殖和分化产生血小板，达到提高循环中血小板水平的目的。

TPO的检测方法：

目前在实验室中进行TPO浓度检测主要使用ELISA的检测方法，主要是采用双抗体夹心法测定，首先用纯化的人血小板生成素（TPO）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入人血小板生成素（TPO），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色，颜色深浅和样品中的人血小板生成素（TPO）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算出样品中人血小板生成素（TPO）的含量。

TPO检测的临床意义：

血小板生成素(TPO)关系到血小板的生成、成熟和释放，在各种血小板减少性疾病中发挥着重要的作用，检测TPO水平对于鉴别各种血小板减少的原因有重要作用。当血小板破坏增加时，TPO水平通常正常或者接近正常，如ITP、输血后紫癜、药物性紫癜等疾病；当因生成减少造成血小板减少时，TPO水平往往升高，如再生障碍性贫血、化疗引发血小板减少；但升高的TPO水平并不总是意味着生成减少造成的血小板减少，如肝硬化时TPO水平却通常是降低的。

TPO的主要作用是促进巨核系造血,可促进巨核细胞发育成熟和使血小板增加,因此对巨核系造血有重要意义。免疫性血小板减少性紫癜(ITP)为巨核系造血异常性疾病，临床以皮肤粘膜或内脏出血为主要表现。TPO能较好地反映 ITP 的发病机制，对提高ITP诊断水平及指导临床治疗并在预后判断上有一定的意义。

标本采集及送检要求

1. 空腹：保持正常生活习惯，清淡饮食，晚餐与第二天早晨取血应隔8小时以上，当天早上不吃早饭，少喝或者不喝水。

2. 用黄帽促凝管或者蓝帽（枸橼酸钠）抗凝管抽取静脉血至少2mL,冷藏保存送检，或者离心取血清或血浆冷冻保存送检。