普通PCR技术和数字PCR技术，什么区别？

归去来兮 2021-6-3 03:46 PM 2474人围观技术

PCR技术自问世以来，在遗传病、病原体、癌基因等分子诊断领域和法医鉴定等方面发挥了巨大作用。按照PCR技术的演进，人们习惯性将PCR技术划分为三代：普通PCR技术、实时荧光定量PCR技术（qPCR）以及数字PCR（dPCR）技术。以前也介绍了很多关于qPCR相关知识，这期给大家分享另外两种PCR技术——普通PCR技术和dPCR技术，以期让大家对这些技术有更进一步的认识。

普通PCR

1、什么是PCR

PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）是一种体外核酸扩增系统，其原理类似DNA分子的天然复制过程，是将在待扩增的DN 片段和与其两侧互补的两个寡聚核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。该技术已成为分子生物学中一种有助于DNA克隆及基因分析的必需工具。

2、PCR基本原理

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。该技术是在模板 DNA、引物和 4 种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于 DNA 聚合酶的酶促合反应，将待扩增的 DNA 片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经「高温变性—低温退火 — 引物延伸」三步反应的多次循环，使 DNA 片段在数量上呈指数增加，从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。DNA 的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。

3、PCR反应要素

①DNA模版：可以是双链、单链、提取染色体的DNA、克隆的质粒DNA；②引物：一对寡聚DNA，分别与模板两侧的3’端序列互补，可使DNA序列得到扩增；③DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）：催化DNA合成；④缓冲液：提供DNA合成反应所需的PH,离子强度等环境；⑤4种单核苷酸：dNTP,提供DNA合成原料。

注：可以按照比例放大或者缩小体系，不同的PCR反应需要优化；按照实验方案进行即可。

4、普通PCR的优缺点

优点：经典方法，国际和国内标准齐全；仪器试剂成本较低、PCR产物可以回收后做其他分子生物学实验。

缺点：容易污染、操作繁琐、只能定性分析、敏感性中等、存在非特异性扩增，当非特异条带与目的条带大小一样时无法区分。

5、应用范围

PCR 是一种用于放大扩增特定的 DNA 片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊 DNA 复制，最大特点是能将微量的 DNA 大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，只要能分离出一点 DNA，就能用 PCR 加以放大，进行比对。

6、普通PCR仪与qPCR仪的比较

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来源: IVD资讯

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