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手把手教你如何看“生化反应曲线”

归去来兮 2021-4-1 04:33 PM 3419人围观技术

前言

生化反应曲线是整个生化反应过程的记录，通过查看反应曲线我们可以知道这个结果是否可靠，也可以发现一些仪器故障（试剂针加样不足、冲洗机构冲洗问题），也能提醒我们光源灯能量不足（俗称，换灯泡），也能查看速率法项目是不是底物耗尽。

那么，到底怎么去看生化反应曲线呢？

生化反应曲线基础理论

分光光度仪原理，运用的是朗伯-比尔定律：A=Kbc

A为吸光度，K为摩尔吸光系数，它与吸光物质的性质及入射光的波长λ有关，c为吸光物质的浓度,单位为mol/L，b为吸收层厚度，单位为cm。Lambert-Beer 定律适合于任何均匀非散射的介质，当相应的比色杯每一次通过光路系统时，光路系统会测量并记录下相应的吸光度。光路系统可以测量后分光后12个波长的相应吸光度。

常用波长: 340, 376, 415, 450, 480, 505, 546, 570, 600, 660, 700, 800nm ，多数检测项目都使用双波长检测方法。（可去除干扰物对检测结果的影响）

全自动生化分析仪常用的方法：终点法和速率法。

1、终点法：（一点终点法、两点终点法）

被测物质在反应过程中完全被转变为产物，到达反应终点，根据终点吸光度的大小求出被测物浓度，称为终点法。

该法称为平衡法更为恰当。从时间-吸光度曲线来看，到达反应终点或平衡点时，吸光度将不再变化。终点法参数设置简单，反应时间一般较长，精密度较好。

一点终点法：在反应到达终点，即在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时选择一个终点吸光度值，用于计算结果。

结果计算公式：待测物浓度CU=（待测吸光度AU－试剂空白吸光度AB）×K

K为校准系数

两点终点法：在被测物反应或指示反应尚未开始时，选择第一个吸光度，在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度，此两点吸光度之差用于计算结果。

2、连续监测法（速率法）：

是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期（各两点间吸光度差值相等）的吸光度值，并以此线性期的单位吸光度变化值（ΔA/min）计算结果。

可以确定线性期并计算ΔA/min，根据此值再准确地计算酶活性，因而使自动生化分析仪在酶活性测定方面显著地优于手工法。连续监测法也可用于测定呈线性反应的代谢物浓度，一般是某些基于酶法测定的代谢物。

酶活性（U/L）＝ΔA/min×理论（或校准）K值。

代谢物浓度CU=ΔA/min×校准K值。

1.反应曲线是什么？

炒菜，应该大家都会吧？

其实，生化项目的检测过程跟炒菜比较相似，炒菜的基本流程是：放油→放菜→放盐，如果每隔18秒，对菜的味道进行打分并记录，再把各个点连接绘成一条曲线的话，炒菜的反应曲线大致是这样的，见下图：

如果只是把油→菜→盐，按顺序放进锅里，这一锅菜应该是没法吃的，对吧？至少得在放油、菜、盐的时候用锅铲搅拌混匀一下，对吧？于是炒菜的反应曲线变成了这样，见下图：

那么，对应的生化项目检测(以奥林巴斯AU系列为例)是这样的：首先，仪器会向反应杯加入试剂1(R1)，紧接着加入样本(S)，搅拌混匀，3分钟后加入试剂2(R2)，搅拌混匀。在这个过程中，仪器会每隔18秒测试一次吸光度并记录，总共28(0-27)个点，然后连接成线，就是我们所看到的反应曲线，见下图：

所以，反应曲线是项目检测整个过程的记录，相当于是一个静态的录像。

2.反应曲线怎么看？

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来源: 临床检验医学

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