生化反应曲线看不懂？只因方法没用对

归去来兮 2021-2-18 04:35 PM 1651人围观技术

可能很多朋友一看到反应曲线这四个字的时候，都有一种抗拒心理，觉得这个太难了，看不懂。其实吧，看懂生化反应曲线没想象中的那么难。

一、反应曲线是什么？

炒菜，应该大家都会吧？其实，生化项目的检测过程跟炒菜比较相似，炒菜的基本流程是：放油→放菜→放盐，如果每隔18秒，对菜的味道进行打分并记录，再把各个点连接绘成一条曲线的话，炒菜的反应曲线大致是这样的，见下图：

如果只是把油→菜→盐，按顺序放进锅里，这一锅菜应该是没法吃的，对吧？至少得在放油、菜、盐的时候用锅铲搅拌混匀一下，对吧？于是炒菜的反应曲线变成了这样，见下图：

那么，对应的生化项目检测(以奥林巴斯AU系列为例)是这样的：首先，仪器会向反应杯加入试剂1(R1)，紧接着加入样本(S)，搅拌混匀，3分钟后加入试剂2(R2)，搅拌混匀。在这个过程中，仪器会每隔18秒测试一次吸光度并记录，总共28(0-27)个点，然后连接成线，就是我们所看到的反应曲线，见下图：

所以，反应曲线是项目检测整个过程的记录，相当于是一个静态的录像。

2、反应曲线怎么看？

在整个检测过程中，试剂1(R1)、样本(S)、试剂2(R2)加入以及搅拌的时间点都是固定的。我们知道了反应曲线是怎么来的之后，需要知道什么样的曲线算正常。

一般正常的反应曲线

a.比较平滑，无明显的跳点；

b.加入R2前后吸光度会发生明显的变化(低浓度样本除外)；

c.终点法的反应曲线，会有一段曲线的吸光度基本无变化；

d.速率法的反应曲线，基本成一条直线(两点速率法除外)。

生化的反应曲线可以分为终点法和速率法两大类，以下列举了一些正常的反应曲线供参考：

1) 终点法的反应曲线

反应到达终点后反应混合物的吸光度不再变化(R1主要用于消除干扰，R2加入之后，反应启动)，就像你炒好的菜在一段时间内味道是不变的。如下图：

2) 速率法的反应曲线

随着反应的进行，吸光度越来越大，但速率保持不变，R2之后基本成一条直线，无明显跳点(两点速率法除外)，如下图：

注：上图在加入R2之前为虚线，是因为R1+S的体积小于仪器要求的最低的反应总体积。

我们在看反应曲线的时候，眼里是一条曲线，脑袋里面浮现的应该是整个的检测过程，去还原仪器的动作，分析从什么时候吸光度突然变得异常。你可以想象成这盘菜是怎么炒出来的。

3、反应曲线有什么用，

什么时候用得着？

(1)结果出现负值(终点法项目)

a.反应曲线有可能是一条直线，样本或R2有可能没有加入；

b. R2加入之前的吸光度比加入后还高，试剂1和试剂2位置放反或者严重脂血标本。

(2)结果明显偏低(速率法项目)

反应曲线可能变成了类似于终点法的曲线，也就是我们通常说的底物耗尽，需要稀释重测。

(3)试剂过期或污染、搅拌棒破损、携带污染以及冲洗站滴水也会在反应曲线上有所体现。

总之，在结果比较可疑的情况下，可以调出反应曲线看看是否正常，有助于找出问题所在。

4、注意事项

1)不同厂家或型号的仪器，加入样本和试剂的顺序可能不同，比如，日立是S+R1+R2。

2)部分仪器横坐标是直接用时间表示，比如贝克曼LX/Dxc系列用的是秒，另外LX/Dxc系列的加样顺序有可能是R1+S+R2或者R1+R2+S。

3)部分仪器没有把各个点连接起来，所以看到的是由点组成的曲线。

4)看反应曲线时，注意纵坐标的刻度，就像远看是美女，近看就不一定了。

5)反应曲线界面还可以看到很多的信息，比如：光电校正、试剂空白、定标的时间以及每一点的吸光度，这些都会有助于判断结果异常的原因。

所以，你应该已经意识到，当有人问为什么某项目的结果偏低、不正常时，仅凭一个结果是很难判断的。

5、其他

临床医生在诊断病情时一般会参考各科的检验报告单，反应曲线相当于是检验科判断结果准确性的“检验报告单”。在遇到可疑的结果时，建议大家调出反应曲线看看。另外，其他仪器也有类似的功能，比如：糖化有层析图，血球仪有散点图等。希望大家能够用好各种仪器提供的“检验报告单”，提高工作效率。

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来源: 检验视界网

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