卡他莫拉菌快速鉴定的方法学及耐药性研究（中）

5. 生长指数(GI)测定: 取经Rchoc 平板24 h 培养的卡他莫拉菌ATCC 25238 菌落于2 ml 无菌盐水中, 制成0.5 麦氏单位菌悬液, 再用无菌盐水进行1 :10 连续稀释, 取10^-5 、10^-6 、10^-7稀释度菌液100 μl分别接种在9 种培养基上(Rchoc 、Schoc 、Choc-V 、SBA 、MHA 、MHB 、BCA 、NUA 、ZLA), 分别置普通孵箱和5 %CO2 孵箱各1 套, 于35 ℃孵育24 、48 、72 、96 h ,计数少于10 个菌落平板上的菌落数, 并用游标卡尺量出菌落直径, 求其均值(mm), 再乘以此最高稀释度的对数即得GI。

6. β 内酰胺酶试验: 用无菌蒸馏水将Nitrocefin纸片沾湿, 取MC 菌落涂在纸片上, 5 min 内纸片变红色者判为β 内酰胺酶阳性。7 .药敏试验:根据美国临床实验室标准化委员会1998年版标准, 采用琼脂平皿二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),用多点接种仪定量种菌。以金黄色葡萄球菌ATCC 29213 为质控菌株监测整个试验过程, 质控值超出范围者, 该批试验数据作废, 找出原因后重复试验。

结果

1. 氧化酶试验: 228 株MC 、15 株淋病奈瑟菌、3株脑膜炎奈瑟菌、153 株奈瑟菌、24 株莫拉菌、6 株博德特菌氧化酶均为阳性, 138 株不动杆菌氧化酶为阴性。

2. DNA 酶试验: 228 株MC 中DNA 酶全为阳性, 15 株淋病奈瑟菌、3 株脑膜炎奈瑟菌、153株奈瑟菌、24 株莫拉菌、6 株博德特菌、138 株不动杆菌中DNA 酶均为阴性。卡他莫拉菌对DNA 酶的敏感性为100 %, 特异性为100 %。

3. 乙酰酯酶试验: 15 株淋病奈瑟菌、3 株脑膜炎奈瑟菌、153 株奈瑟菌、24 株莫拉菌亚属、6 株博德特菌乙酰酯酶均为阴性, 138 株不动杆菌中乙酰酯酶阳性114 株(占82.6 %), 228 株卡他莫拉菌乙酰酯酶全为阳性。卡他莫拉菌对乙酰酯酶的敏感性为100 %, 特异性为75.7 %。但与近缘菌(淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、奈瑟菌属、莫拉菌亚属)比较特异性为100 %。

4. β内酰胺酶: 2 28 株MC 中β 内酰胺酶阳性212株, 24株莫拉菌亚属β内酰胺酶阳性5株, 15株淋病奈瑟菌、3 株脑膜炎奈瑟菌、153 株奈瑟菌、6 株博德特菌β 内酰胺酶均为阴性。

5. 不同培养基上的GI 值比较: MC 的ATCC 25238 在ZLA 培养基上不生长;在MHA 、BCA 、NUA 3种培养基上生长不良, 分别经24 , 48 , 72 , 96 h 培养, 与Rchoc 琼脂培养基的GI 值比较, 差异有显著性(P<0.05);MC 的ATCC 25238 在Rchoc 、Schoc 、Choc-V 、SBA 、MHB 5种培养基上经24 , 48 , 72 , 96 h 培养的GI 值结果比较, 差异无明显意义(P>0.05);5 %CO₂环境与空气环境比较, 对GI 值结果影响不明显(P >0.05)。结果如表1 所示。