流行性感冒病毒

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病毒简介及分类

   流行性感冒病毒(influenza virus)，是正粘病毒(Orthomyxoviridae)的代表种，简称流感病毒，包括人流感病毒和动物流感病毒，人流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，是流行性感冒(流感)的病原体。其中甲型流感病毒抗原性易发生变异，可以进一步分为H1N1、H3N2、H5N1、H7N9等亚型多次引起世界性大流行。例如1918~1919年的大流行中，全世界至少有2000万~4000万人死于流感;乙型流感病毒对人类致病性也比较强，常常引起局部爆发，但是人们还没有发现乙型流感病毒引起过世界性大流行;丙型流感病毒主要以散在形式出现，主要侵袭婴幼儿，很少造成流行。因此对于甲型和乙型流感病毒的检测有相对较大的临床意义。甲型流感病毒于1933年分离成功，乙型流感病毒于1940年获得，丙型流感病毒直到1949年才成功分离。近年来才发现的牛流感病毒将归为丁(D)型。

形态结构

      流感病毒呈球形，新分离的毒株则多呈丝状，其直径在80至120纳米之间，丝状流感病毒的长度可达4000纳米。流感病毒结构自外而内可分为包膜、基质蛋白以及核心三部分。核心病毒的核心包含了存贮病毒信息的遗传物质以及复制这些信息必须的酶。流感病毒的遗传物质是单股负链RNA，简写为ss-RNA，ss-RNA与核蛋白 (NP)相结合，缠绕成核糖核蛋白体以密度极高的形式存在。除了核糖核蛋白体，还有负责RNA转录的RNA多聚酶。甲型和乙型流感病毒的RNA由8个节段组成，丙型流感病毒则比它们少一个节段，第1、2、3个节段编码的是RNA多聚集酶，第4个节段负责编码血凝素;第5个节段负责编码核蛋白，第6个节段编码的是神经氨酸酶;第7个节段编码基质蛋白，第8个节段编码的是一种能起到拼接RNA功能的非结构蛋白，这种蛋白的其他功能尚不得而知。丙型流感病毒缺少的是第六个节段，其第四节段编码的血凝素可以同时行使神经氨酸酶的功能。

基质蛋白

     基质蛋白构成了病毒的外壳骨架，实际上骨架中除了基质蛋白 (M1)之外还有膜蛋白 (M2)。M2蛋白具有离子(主要是Na+)通道和调节膜内PH值的作用，但数量很少。基质蛋白与病毒最外层的包膜紧密结合起到保护病毒核心和维系病毒空间结构的作用。当流感病毒在宿主细胞内完成其繁殖之后，基质蛋白是分布在宿主细胞细胞膜内壁上的，成型的病毒核衣壳能够识别宿主细胞膜上含有基质蛋白的部位，与之结合形

成病毒结构，并以出芽的形式突出释放成熟病毒。

包膜

     包膜是包裹在基质蛋白之外的一层磷脂双分子层膜，这层膜来源于宿主的细胞膜，成熟的流感病毒从宿主细胞出芽，将宿主的细胞膜包裹在自己身上之后脱离细胞，去感染下一个目标。包膜中除了磷脂分子之外，还有两种非常重要的糖蛋白:血凝素和神经氨酸酶。这两类蛋白突出病毒体外，长度约为10至40纳米，被称作刺突。一般一个流感病毒表面会分布有500个血凝素刺突和100个神经氨酸酶刺突。在甲型流感病毒中血凝素和神经氨酸酶的抗原性会发生变化，这是区分病毒毒株亚型的依据。

     血凝素(HA)呈柱状，能与人、鸟、猪豚鼠等动物红细胞表面的受体相结合引起凝血，故而被称作血凝素。血凝素蛋白水解后分为轻链和重链两部分，后者可以与宿主细胞膜上的唾液酸受体相结合，前者则可以协助病毒包膜与宿主细胞膜相互融合。血凝素在病毒导入宿主细胞的过程中扮演了重要角色。血凝素具有免疫原性，抗血凝素抗体可以中和流感病毒。

     神经氨酸酶(NA)是一个呈蘑菇状的四聚体糖蛋白，具有水解唾液酸的活性，当成熟的流感病毒经出芽的方式脱离宿主细胞之后，病毒表面的血凝素会经由唾液酸受体与宿主细胞膜保持联系，需要由神经氨酸酶将唾液酸水解，切断病毒与宿主细胞的最后联系,使病毒能顺利从宿主细胞中释放，继而感染下一个宿主细胞。因此神经氨酸酶也成为流感治

疗药物的一个作用靶点，针对此酶设计的奥司他韦是最著名的抗流感药物之一。

病毒变异

      流感病毒变异有抗原性变异、温度敏感性变异、宿主范围以及对非特异性抑制物敏感性等方面的变异，但最主要的是抗原性变异。抗原性变异与其他病毒不同，特点是表面抗原HA和NA易变异。变异有两种形式，即抗原性转变和抗原性漂移。流感病毒表面抗原变异幅度的大小，直接影响到流感规模。若变异幅度小，属于量变，称为抗原漂移，产生病毒的信株，可引起中小型流行。如果抗原变异幅度大，属于质变，称为抗原性转变，形成新的亚型，此时人群普遍缺乏对它的免疫力，往往引起较大的流行，甚至世界性流行。如甲型流感病毒的HA，NA容易发生抗原转变，构成HA,NA的大部分或全部氨基酸均可发生改变，出现抗原性完全不同的新亚型。变异由量变累为质变。当新的流感病毒亚型出现时，人群普遍对其缺乏免疫。

诊断方法

     病毒感染还会诱导干扰素的表达和细胞免疫调理，造成一些自身免疫反应，包括高热、头痛、腓肠肌及全身肌肉疼痛等，病毒代谢的毒素样产物以及细胞坏死释放产物也会造成和加剧上述反应。由于流感病毒感染会降低呼吸道粘膜上皮细胞清除和黏附异物的能力，所以大大降低了人体抵御呼吸道感染的能力，因此流感经常会造成继发性感染，由流感造成的继发性肺炎是流感致死的主要死因之一。在流行期结合临床症状诊断流感并不困难，但要确诊或流行监测时必须进行实验室检查，主要包括病毒分离培养、血清学诊断和快速诊断方法。

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甲型乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）（快速）

检测原理 

     甲乙流检测试剂运用胶体金标记和免疫层析技术，检测临床样本中的甲乙流抗原并以可视信号的方式直接显示结果。加入充分裂解的临床标本后，甲乙流抗原在试剂条的前段与胶体金标记的甲乙流抗体结合，形成抗原抗体复合物，该复合物在试剂膜上层析流动，经单克隆抗体条带(A或B测试线）时再次结合甲乙流单克隆抗体，形成双抗体夹心，并显示紫红色条带，此条带的出现表明样本中存在甲乙流抗原。当复合物继续层析流动至吸附区，在控制区（C线)与包被羊抗鼠多克隆抗体的条带结合，此条带作为试剂合格和正确操作的指控线，不论标本中是否存在甲乙流抗甲型流感病毒原，此条带都应当出现。

检测结果判读

     阳性（+）：俩条或三条紫红色带出现。一条位于质控区(C）内，另一条或俩条于测试区（A,B）内。阳性结果表明：标本中含有甲乙流抗原。其中A区出现的条带代表甲型流感病毒抗原，B区出现的条带代表乙型流感病毒抗原。

     阴性（-）：仅质控区（C）出现一条紫红色条带，在测试区无紫红色条带内出现。阴性结果表明：样本中不含甲乙流抗原，或者含量低于本产品的检测水平。

     无效：质控区（C），未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测试重新测试。如果问题仍存在，应立即停止用该批号产品。

检测方法的局限性

   1.该试剂可快速检测甲乙流病毒，对丙型流感病毒不发生反应。流感的诊断应结合临床症状，病毒分离培养等其他的检查结果，由医生综合判断进行确诊。

   2.甲乙流病毒已失活的情况下标本中仍可能有甲乙流抗原，因此本产品的检测结果可能与微生物培养结果不符。

   3.甲乙流检测试剂所使用的单克隆抗体可能无法检测出所有的甲乙流抗原变异体或者甲乙流新的菌株。